冯滢滢
- 作品数：16 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军第二炮兵总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 带myc标签的人造血相关PBX相互作用蛋白真核表达载体的构建及其功能研究被引量：1
- 2014年
- 目的:构建带myc标签的造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的真核表达载体,获得myc-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体,通过Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染人肝癌HepG2细胞,通过Western印迹检测其对AKT、ERK信号通路中AKT、ERK磷酸化水平的影响。结果:双酶切和测序结果表明myc-HPIP真核表达质粒构建成功,转染HepG2细胞后表达了myc-HPIP融合蛋白;Western印迹证明myc-HPIP可升高AKT、ERK的磷酸化水平。结论:构建了带myc标签的人HPIP真核表达载体,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。
- 李玲闫志风蒋昊冯滢滢冀全博黄蓉周丽英王鹏徐小洁叶棋浓
- 关键词：真核表达
- H-Ras结构域的原核表达及纯化
- 2015年
- 目的:克隆人H-Ras部分片段基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化。方法:采用PCR技术从质粒Myc-H-Ras中扩增H-Ras(1-165)和H-Ras(165-189)结构域片段,将其克隆到p GEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物。结果:从Myc-H-Ras质粒中分别扩增获得约500和100 bp的DNA片段,并克隆至p GEX-KG载体,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别为46×103和29×103的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H-Ras(1-165)和GST-H-Ras(165-189)。结论:获得了重组蛋白GST-H-Ras(1-165)、GST-H-Ras(165-189),为后续深入研究H-Ras影响肿瘤细胞生长的机制奠定了实验基础。
- 冯滢滢张云静徐小洁李玲郭靖洪甜张蓉赵克叶棋浓
- 关键词：片段原核表达纯化
- 利用GST融合蛋白表达系统表达与纯化人N-Ras蛋白被引量：1
- 2015年
- 目的:克隆人N-ras蛋白全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人N-ras蛋白全长编码区基因,将其克隆到p GEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,SDS-PAGE鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中扩增获得约600 bp的DNA片段,并克隆至p GEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量约47×103的目的蛋白;纯化后,经鉴定获得了纯度较高的重组蛋白GST-N-Ras。结论:获得了重组蛋白GST-N-ras,为后续深入研究Ras基因与其他癌基因、抑癌基因的相互作用奠定了基础。
- 张云静冯滢滢徐小洁梁迎春张立王涛李玲郭靖纪贝贝张蓉叶棋浓
- 关键词：小G蛋白原核表达纯化
- 人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究被引量：2
- 2015年
- 目的:构建带myc标签的Bcl2真核表达载体,获得myc-Bcl2融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Bcl2编码序列,将其插入p CMV-myc载体,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测p CMV-myc-Bcl2重组质粒对细胞凋亡的影响。结果:双酶切和测序结果表明p CMV-myc-Bcl2真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后myc-Bcl2蛋白成功表达;流式细胞仪检测结果显示,myc-Bcl2明显抑制乳腺癌细胞系的凋亡。结论:构建了带myc标签的人Bcl2真核表达载体,为进一步研究Bcl2在细胞凋亡中的功能奠定了基础。
- 史平安徐小洁闫志风范忠义王涛冯滢滢梁迎春李玲郭靖叶棋浓吕朝晖
- 关键词：克隆细胞凋亡
- 人H-ras基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的促进作用
- 2015年
- 目的:构建癌基因H-ras真核表达载体,并检测其对肿瘤细胞生长的作用。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增H-ras基因片段,将其插入p XJ-40-myc载体后转染人胚肾HEK293T细胞,用Western印迹检测该融合蛋白的表达;将重组质粒转染人肠癌HCT-116细胞和人肝癌Hep G2细胞,通过细胞生长曲线(CCK8法)对myc-H-ras影响肿瘤细胞生长的情况进行分析。结果:利用PCR技术,从乳腺文库中扩增出H-ras基因片段,并成功插入p XJ-40-myc载体;重组质粒转染HEK293T细胞,经Western印迹检测融合蛋白正确表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-H-ras的结肠癌HCT-116细胞和人肝癌Hep G2细胞比转染空载体的细胞生长快。结论:构建了人H-ras基因真核表达载体,为进一步研究ras基因在肿瘤细胞中的作用奠定了一定基础。
- 张云静冯滢滢徐小洁王涛张柯梁迎春张蓉叶棋浓
- 关键词：H-RAS基因真核表达载体肿瘤细胞
- 经肛吻合器直肠切除术治疗出口梗阻型便秘的并发症分析被引量：11
- 2011年
- 目的评价经肛吻合器直肠切除术（STARR）治疗出口梗阻型便秘（ODS）的安全性。方法回顾性分析2007年1月至2008年10月间第二炮兵总医院采用STARR治疗112例直肠前突和（或）直肠内套叠相关性ODS女性病例的临床资料．统计围手术期及术后远期并发症发生情况。结果术后早期发生并发症18例（16．1％），包括肛门失禁（4．5％）、吻合口出血（2．7％）、吻合口部分裂开（0．9％）、肛裂（2．7％）、急性尿潴留（1．8％）、血栓性外痔（1．8％）、直肠阴道隔血肿（0．9％）、粪便嵌塞（0．9％），其中2例患者（1．8％）因并发症需再次手术干预。术后中位随访24个月，远期发生并发症6例（5．4％），包括：肛门失禁（1．8％）、排粪急迫感（0．9％）、吻合口周围炎致慢性疼痛（1．8％）、直肠憩室致慢性疼痛（0．9％），其中3例患者（2．7％）需手术治疗。结论STARR是治疗出口梗阻型便秘相对安全的术式。
- 张斌丁健华张萌尹淑慧冯滢滢赵勇朱军赵克
- 关键词：出口梗阻型便秘直肠前突直肠内套叠
- myc-p62融合蛋白的表达及其对ERK磷酸化的抑制
- 2015年
- 目的构建带myc标签的自噬标志蛋白P62基因真核表达载体,获得myc-p62融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法利用聚合酶链式反应从乳腺文库中体外扩增人P62基因编码序列,将其与空p XJ-40-myc载体正确连接,重组质粒myc-p62转染HEK293T细胞,用Western blot法检测该融合蛋白的表达情况,并检测该蛋白对细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。结果构建得到myc-P62基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源性基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达,并能够抑制ERK磷酸化。结论成功表达了myc-p62融合蛋白并能抑制ERK磷酸化。
- 张云静冯滢滢张立徐小洁王涛范忠义叶棋浓张蓉
- 关键词：真核表达载体自噬ERK磷酸化
- 人细胞周期蛋白H基因的真核表达载体构建和表达及功能检测被引量：1
- 2014年
- 细胞周期蛋白H（cyclin H）是一种含323个氨基酸,相对分子质量（Mr）为38 000的细胞周期调控蛋白,普遍存在于真核细胞中,可与细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin-dependent kinase 7,CDK7）共同参与细胞周期和基因转录的合理调控,其复合体可以催化各种CDK分子的活化,从而影响细胞增殖。
- 冀全博徐小洁张强王涛冯滢滢李玲黄蓉周丽英叶棋浓王岩
- 关键词：真核表达
- 人FOXO3a基因真核表达载体的构建及其功能验证被引量：1
- 2014年
- 目的:构建带myc标签的人FOXO3a基因真核表达载体,并对其功能进行初步检测。方法:采用PCR技术,从乳腺文库中扩增人FOXO3a基因,并将其正确插入pXJ-40-myc载体;将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞系ZR75-1、MCF-7后,通过Western印迹检测其表达情况,并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果:双酶切和测序鉴定表明myc-FOXO3a真核表达质粒构建成功,转染乳腺癌ZR75-1、MCF-7细胞后目的基因成功表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-FOXO3a的乳腺癌细胞较空载体细胞生长较慢。结论:构建了带myc标签的人FOXO3a基因真核表达载体,为进一步研究FOXO3a在乳腺癌中的功能奠定了基础。
- 郭芸菲王涛徐小洁周丽英梁迎春冯滢滢李玲郭靖叶棋浓江泽飞
- 关键词：克隆真核表达
- 人VHL基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的抑制被引量：2
- 2014年
- 目的:构建人抑癌基因VHL的真核表达载体,并验证其对肿瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人VHL基因,将其克隆到p XJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染人胚肾293T细胞,通过蛋白免疫印迹鉴定其表达;转染人乳腺癌ZR75-1细胞和肝癌Hep G2细胞,通过CCK8法测定细胞生长曲线。结果:从人乳腺文库中扩增得到约650 bp的DNA片段,并克隆至p XJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,蛋白免疫印迹检测到相对分子质量为26×103的目的基因表达产物;细胞生长曲线显示,转染myc-VHL的乳腺癌、肝癌细胞较空载体细胞生长慢。结论:构建了myc-VHL真核表达载体,myc-VHL抑制癌细胞生长,为进一步研究VHL在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。
- 李玲王婷梁迎春张立冯滢滢周丽英冀全博郭靖徐小洁叶棋浓
- 关键词：克隆真核表达肿瘤细胞
