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SARS病毒的S1蛋白基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立: 2006年; 为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法，利用PCR扩增，克隆了SARS冠状病毒S蛋白基因中从第68～918位碱基的基因序列（S1蛋白）．并通过pGEX-4T1表达系统在大肠杆菌BL21中高效表达了SARS病毒S1蛋白，用超声波破碎菌体及用不同浓度的尿素洗涤包涵体，纯化了S1蛋白，纯度可达75％以上．以在E．coli高效表达的S1蛋白为抗原，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人IgG为二抗，建立了检测SARS抗体的间接ELISA方法．经检测，筛选出最佳反应条件为5μg／孔．用纯化的E．coli表达的抗原包被酶标板，用5g／L的小牛血清进行封闭，以正常E．coli裂解上清液稀释待检血清．实验表明，应用表达的蛋白作为诊断SARS抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点．; 王勇鑫王瑛瑛赵宝华何宏轩; 关键词：SARS 原核表达 S1蛋白 ELISA

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何宏轩