郑岩
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：吉林医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省教育厅基金吉林省教育厅科研项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- pEGFP-N1脂质体转染方法的优化及其应用被引量：5
- 2016年
- 目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞。转染后36h,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率;台盼蓝染色法检测细胞存活率,以此获得优化的转染条件。同时将pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5分别以上述条件转染,并获取相应优化的转染条件。结果:在质粒质量固定的条件下,随着脂质体质量的增加,其转染效率和细胞存活率升高;但是当质粒∶脂质体>1∶4时,转染效率和细胞存活率下降。在质粒和脂质体比例固定而质量增加时,其转染效率和细胞存活率下降;当质粒∶脂质体>3.2μg∶12.8μL时,转染效率降低。应用脂质体介导的方法转染pEGFP-N1和转染pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5时,在质粒与脂质体的配比为1∶4(3.2μg∶12.8μL)时,转染效率达最高。结论:在应用脂质体介导的目的基因转染时,pEGFP-N1优化的转染条件具有较为广泛的适用性,可用作后续目的基因高效转染优化条件。
- 李凤娥向国艳孔繁利郝峰杨紫嫣郑岩方芳
- 关键词：脂质体PEGFP-N1转染
- 氯离子敏感的YFP-H148Q/V163S在FRT细胞中的表达及其应用研究
- 2015年
- 运用点突变试剂盒构建pcDNA3.1-YFP-H148Q/V163真核表达载体,脂质体介导YFP-H148Q/V163S转染稳定表达Ano1的FRT细胞,荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/V163S对其氯离子的敏感性。测序结果显示,YFP(yellow fluorescent protein)特异编码序列上第508-510位碱基CAC突变为CAG,148位组氨酸H突变为谷氨酰胺Q;第553-555位碱基GTG突变为AGC,163位缬氨酸V突变为丝氨酸S。荧光淬灭动力学试验结果显示,向表达YFP-H148Q/V163S的FRT细胞加入Anol激活剂ionomycin和Cl^-,其相对荧光强度明显下降。pcDNA3.1-YFP-H148Q/V163真核表达载体成功构建,并证实表达于FRT胞浆中的YFP-H148Q/V163S具有对氯离子敏感的特性。
- 郑锴张雲乔许会静方芳杨紫嫣郑岩董校汝李荣霞郝峰
- △F508-CFTR在囊性纤维化治疗中的研究近况及前景
- 2018年
- 囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)是一种由环磷酸腺苷c AMP激活的氯离子通道,CFTR蛋白主要翻译表达在一些吸收和分泌上皮的细胞膜上,参与跨上皮的离子和水分子分泌和流动等各种生理活动。在遗传性疾病囊性纤维化(CF)中,CFTR蛋白起着非常重要的作用,其中超过70%的CF患者都属于△F508-CFTR型。本文针对△F508-CFTR突变型的CF个性化治疗的研究现状及前景作一综述。
- 杨紫嫣孙莹霄董校汝郑岩李荣霞张超可李雨澎郝峰
- 关键词：囊性纤维化
- YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究被引量：5
- 2015年
- 为探讨YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子的敏感性,应用点突变试剂盒将真核表达载体YFP特异编码序列第148位氨基酸H突变为Q,第152位氨基酸I突变为L,脂质体介导将YFP-H148Q/I152L转染入稳定表达Ano2的FRT细胞中,应用荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/I152对其碘离子的敏感性。测序结果证实,成功将YFP突变为YFP-H148Q/I152L,且荧光淬灭动力学试验表明,表达YFP-H148Q/I152L的FRT细胞在加入激活剂和碘离子后,相对荧光强度显著下降。表明成功构建YFP-H148Q/I152L真核表达载体,并证实表达于FRT胞浆中的YFPH148Q/I152L具有对碘离子敏感的特性。
- 郑锴朱杭飞王长文郭素红李正祎藏雨轩张雲乔郑岩方芳郝峰
