杨明峰
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究
- 2010年
- 利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序。测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%。Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础。
- 李贞陈创夫乔军任艳张辉杨明峰刘佳旭倪伟
- 关键词：荷斯坦奶牛Γ-干扰素基因原核表达
