成春明
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南通大学航海医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 铁调节蛋白1真核表达质粒的构建及功能初步研究
- 2012年
- 目的:构建人来源铁调节蛋白1(IRP1)真核表达质粒,检测该质粒在人肝癌细胞(HepG2)中的表达及其对转铁蛋白受体1(TfR1)和二价金属转运体1(DMT1)表达的影响。方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应获得IRP1的cDNA。根据不同的酶切位点分别构建IRP1 4个分段目的基因,依次连接4段基因并将其构建入真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证碱基序列。用FuGENEHD将质粒pcDNA3.1(+)-IRP1瞬时转染至HepG2。以QRT-PCR方法检测转染pcDNA3.1(+)-IRP1质粒,观察对IRP1以及其调控基因TfR1和DMT1表达的影响。结果:扩增出IRP1全长cDNA,构建真核表达质粒,4个质粒经相应酶双酶切后,分子量分别为1261bp、502bp、600bp、310bp。经检测质粒转染至HepG2细胞后,IRP1表达显著高于转染空载质粒细胞。结果显示与对照组相比,转染真核pcDNA3.1(+)-IRP1质粒后IRP1表达显著上调约50倍,TfR1表达增加约3倍,DMT1表达增加约1.5倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建人IRP1基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IRP1,并证明其能在HepG2细胞内高表达,从而影响IRP1调控基因的表达。
- 成春明王丹朱俐
- 关键词：真核表达质粒构建逆转录聚合酶链反应原发性肝细胞癌
- 低氧对铁代谢相关蛋白表达调控的影响
- 成春明张梦婉朱俐
- 关键词：低氧铁代谢基因表达低氧诱导因子1铁调节蛋白
