刘玛峰
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 鼠脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅱα)基因的克隆及原核表达
- 2009年
- 根据鼠脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNaseⅡ)基因设计引物,通过RT-PCR扩增出鼠DNaseⅡα基因片段,克隆到pMD-18T载体,然后转化至大肠杆菌JM109。经鉴定及序列测定,克隆基因与鼠DNaseⅡα基因序列完全一致,大小为1 008 bp。将重组质粒pMD-DNaseⅡα进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经PCR和双酶切鉴定及序列分析正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,然后进行初步纯化,Western-blot鉴定。结果表明,本试验成功构建了pET-28a-DNaseⅡα表达载体;表达产物以包涵体形式存在,相对分子质量约为38 800;初步纯化的目的蛋白在SDS-PAGE图谱上呈单一条带,Western-blot鉴定能与抗体发生特异免疫反应。
- 王卫芳刘明远欧阳红生吴秀萍王学林刘玛峰杨勇孙磊王子见张瑞于艳玲
- 关键词：克隆原核表达
