于康振
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
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- H9N2亚型AIVHA基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 【研究目的】利用杆状病毒表达系统表达AIVH9N2亚型HA基因以获得可以利用的HA蛋白;【方法】应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIVH9N2亚型HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的HA基因,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点将H9HA基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9HA并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9HA,再将其转染昆虫细胞HighFive,进行PCR鉴定、SDS-PAGE和WesternBlot检测;【结果】HA基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,HA基因在HighFive细胞中得到了表达,H9HA大小约为67KD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性;【结论】HA基因在昆虫细胞获得表达,为进一步生产检测H9N2亚型流感病毒的检测试剂或者构建亚单位疫苗奠定了基础。
- 詹爱军王新卫谭婉明马静云毕英佐于康振曹永长
- 关键词：禽流感病毒血凝素蛋白杆状病毒表达克隆
- H9N2亚型AIV NS1基因的克隆及其在杆状病毒系统的表达被引量：1
- 2008年
- 应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的NS1基因,通过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切位点将NS1基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9NS1并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9NS1,再将其转染昆虫细胞sf9,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDS-PAGE和WesternBlot检测,H9 NS1基因在sf9细胞中得到了表达,H9 NS1大小约为28kD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。
- 詹爱军王新卫徐峥谭婉明陈靳松毕英佐于康振
- 关键词：禽流感病毒非结构蛋白杆状病毒表达
