马雪萍 作品数:6 被引量:15 H指数:2 供职机构: 南京军区南京总医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省科技支撑计划项目 转基因生物新品种培育专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 理学 更多>>
单管可视化环介导等温扩增技术快速检测恶性疟原虫 被引量:10 2014年 目的:建立一种基于环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)的恶性疟原虫高灵敏可视化闭管检测方法。方法:针对恶性疟原虫核糖体DNA的序列保守区设计LAMP引物,通过优化LAMP体系中的Mg2+、甜菜碱浓度和反应温度等因素,建立环介导等温扩增法;并结合蜡封反应管对产物进行检测,检测结果可直接通过肉眼观察SYBR Green I荧光显色进行判定。结果:本方法可检测到70个拷贝/管的恶性疟原虫核酸片段,并具有高特异性,可区分检测常见的血液病毒。该法具有如下优点:1、整个反应恒温进行,无需热循环仪;2、闭管检测,极大降低了扩增产物交叉污染的风险;3、检测速度快,整个检测过程只需30 min。结论:该法的建立为恶性疟原虫的现场快速筛检提供了一种简便、高灵敏、高特异的工具。 江再茂 马雪萍 殷竹君 陆妍 曹晓梅 武海萍关键词:恶性疟原虫 环介导等温扩增 用于高灵敏可视化检测松材线虫的闭管等温扩增法 被引量:3 2014年 建立了一种基于环介导等温核酸扩增技术(LAMP)的松材线虫高灵敏可视化闭管检测方法。针对松材线虫核糖体DNA的序列保守区域设计LAMP引物,通过优化LAMP体系中的Mg2+、甜菜碱浓度和反应温度等因素,建立了环介导等温扩增法;并结合蜡封反应管对产物进行检测,检测结果可直接通过肉眼观察SYBR Green I荧光显色进行判定。结果表明,本方法可检测到低至10拷贝/管的松材线虫核酸片段,可对单条线虫进行检测,并且具有很高的特异性,能区分检测松材线虫与拟松材线虫。由于整个反应恒温进行,无需热循环仪;闭管检测极大地降低了扩增产物交叉污染的风险;检测速度快,整个检测过程只需40 min,为松材线虫的现场快速筛检提供了一种简便、高灵敏、高特异的工具。 马雪萍 成思佳 武海萍 宋沁馨 邹秉杰 周国华关键词:松材线虫 环介导等温扩增 高灵敏度 高灵敏焦测序结合生物发光分析仪检测甲型H1N1流感病毒 被引量:2 2014年 目的:建立基于核酸序列分析的快速、准确、低成本的甲型H1N1流感病毒检测方法。方法:通过优化焦测序反应体系中ATP硫酸化酶和荧光素酶的浓度,建立高灵敏的焦测序反应体系;将该体系应用于低成本、小型化的便携式生物发光分析仪,焦测序分析流感病毒M、NP、HA基因片段的核酸序列。结果:优化后的焦测序反应体系可检测低至10 fmol的DNA样本,检测灵敏度较传统焦测序提高了10倍以上。对两例样本进行检测,根据所测得的M、NP、HA基因特异性片段序列,可以确认其均为甲型H1N1感染;另外,对M2蛋白阻断剂耐药性标志位点(S31N突变)的测定结果显示该病毒存在S31N突变,为M2蛋白阻断剂耐药型。结论:高灵敏焦测序体系结合便携式生物发光分析仪成功实现了对甲型H1N1流感病毒快速、准确的低成本检测。 武海萍 刘云龙 童欢 马雪萍 卜莹 周国华关键词:甲型H1N1流感病毒 耐药性突变 环介导等温扩增偶联核酸侵入反应的纳米金可视化核酸检测新方法 环介导等温扩增(LAMP)是一种扩增速度快、灵敏度高的核酸扩增技术,但多重LAMP扩增的产物常难以检测。常规的LAMP产物检测基于检测扩增的副产物,而无法识别多重LAMP扩增产物。而特异性识别多重LAMP产物的检测技术又... 陆妍 马雪萍 王建平 邹秉杰 周国华关键词:纳米金 文献传递 环介导等温扩增偶联核酸侵入反应的纳米金可视化核酸检测新方法 环介导等温扩增(LAMP)是一种扩增速度快、灵敏度高的核酸扩增技术,但多重LAMP扩增的产物常难以检测。常规的LAMP产物检测基于检测扩增的副产物,而无法识别多重LAMP扩增产物。而特异性识别多重LAMP产物的检测技术又... 陆妍 马雪萍 王建平 邹秉杰 周国华关键词:纳米金 文献传递 环介导等温扩增偶联核酸侵入反应的纳米金可视化核酸检测新方法 环介导等温扩增是一种扩增速度快、灵敏度高的核酸扩增技术。但其多重扩增产物难以检测。常规的LAMP产物检测如荧光法、浊度法均为非特异性的检测,而无法识别多重扩增产物。而特异性识别多重LAMP产物的检测技术如使用荧光探针或引... 陆妍 马雪萍 王建平 盛楠 董天晖 邹秉杰 周国华关键词:纳米金