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Cav1.2通道CT1片断突变体的质粒构建和蛋白表达: 2015年; 目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒。转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用IPTG诱导GST融合蛋白表达,分离纯化后采用SDS-PAGE检测CT1及其突变体蛋白的相对分子量和纯度。结果 CT1片段及其突变体融合蛋白得到了正确、大量表达,提取纯化后的CT1片段及其突变体融合蛋白具有较高的纯度。结论成功构建了Cav1.2通道CT1片断及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得了CT1突变体融合蛋白,为深入研究CT1片断在Cav1.2通道调节中的作用和机制奠定基础。; 雷明赵美眯封瑞王红梅毛楠朱彤郝丽英; 关键词：融合蛋白突变体

心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用被引量：1: 2017年; 目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。; 苏敬阳邵冬雪雷明康泽赵君方涵田郭凤赵美眯郝丽英封瑞; 关键词：NT 纯化 CAM GS

Cav1.2钙离子通道三维结构的同源建模及其应用被引量：4: 2017年; 目的构建心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,检验模型的准确性与可靠性。方法利用SWISS-MODEL同源建模服务器,对豚鼠心肌细胞Cav1.2通道α1亚基进行同源建模,建模结果提交至加州大学蛋白质结构在线检测服务器进行检测评估,并对结构模型进行打分。利用MOE软件分子对接程序模拟阻断剂或药物与Cav1.2通道模型的结合,进一步验证通道模型的准确性与可靠性。结果在SWISS-MODEL服务器上搜寻到的模板序列Cav1.1α1S与目标序列Cav1.2α1C均为L型钙通道,序列比对结果显示其同源性高达71.5%,选择自动模式(automated mode)进行同源建模。L型钙通道阻断剂维拉帕米、硝苯地平、地尔硫卓能结合到Cav1.2通道三维结构模型的特定区域,而钠通道特异性阻断剂河豚毒素并未与该模型相结合,中药有效成份白花前胡甲素和小檗碱与该模型也有一定的结合。结论成功构建了心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,为后续研究提供了可靠样本,也为同源建模在研究离子通道三维结构预测中的应用奠定了基础。; 雷明苏敬阳李卓晏珊孙雪菲朱彤郝丽英; 关键词：离子通道同源建模分子对接

High intracellular Mg2+ affects upon the activities of L-type calcium channel in guinea-pig ven-tricular myocytes: This study is aimed to investigate the effects of high intracellular Mg2+(Mg2+i)upon the gating-mechanism of L...; 赵美眯雷明邵冬雪王红梅封瑞胡慧媛孙雪菲郭凤赵金生郝丽英; 文献传递

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雷明