刘晋源
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：东华大学化学化工与生物工程学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家大学生创新性实验计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人体鼠双微体2C端结构域ZF&RING重组蛋白的表达、纯化及单体结构研究
- 2016年
- 目的:通过在大肠杆菌SUMO系统中对鼠双微体2(MDM2)C端结构域ZF&RING(aa.300-491)进行构建并进行表达,酶切和纯化,从而得到MDM2蛋白C端结构域的单体结构,为其后续的晶体研究及MDM2非p53依赖途径的研究提供途径。方法:利用大肠杆菌SUMO表达系统对zf&ring基因进行重组构建。构建成功的表达载体经诱导表达优化后,通过Ni-NTA进行亲和层析纯化,并利用SDS-PAGE及Western blot鉴定分析。纯化后的融合蛋白经ULP1酶切得到目的蛋白ZF&RING,并通过Hi Trap Q FF离子交换层析检验和去除杂质DNA。最后通过分子筛检验其蛋白结构。结果:构建了SUMO-ZF&RING重组载体。重组载体在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化并酶切后的目的蛋白ZF&RING以单体形式存在。结论:通过原核表达、纯化、酶切及层析发鉴定,成功获得高稳定、高纯度且为单体结构的MDM2 C端结构域ZF&RING蛋白,为后续关于MDM2,尤其是其非p53依赖途径的结构学和功能学提供了思路和途径。
- 孟希陈婷张云龙黄旋刘晋源陆昌瑞
- 关键词：C端结构域蛋白表达纯化
