目的:探究胶原纤维在酒精性肝损伤发展过程中各个阶段的变化规律及其与酒精性肝损伤的关系.方法:饲养清洁健康BALB/c♂小鼠40只,随机分为对照组(n=3)与模型组(n=37).将对照组3只小鼠处死,取肝;模型组小鼠每日给予0.15 m L/10 kg 56°红星二锅头白酒灌胃,持续4 wk,于开始灌胃后1、2、3、4 w k各取3只小鼠进行肝脏取材.天狼星红染色法观察小鼠肝组织胶原纤维病理变化情况,蛋白印迹法检测小鼠肝脏增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,P C N A)蛋白表达及变化趋势.运用ImageProPlus6.0对病理切片样本进行积分光密度(IOD)定量分析,Gel Pro4.0软件对目标蛋白条带灰度值进行测定.运用SPSS16.0对数据进行处理,用ANOVE法和非参数秩和检验法进行显著性分析.结果:第1、2周组小鼠肝组织胶原纤维含量持续显著增高(852.21±10.65 vs 345.24±65.94,1054.15±10.80 vs 852.21±10.65,P<0.01),第2周达到最高,随后第3、4周小鼠肝组织胶原纤维含量依次降低(588.75±17.18 vs 1054.15±10.80,559.40±14.17,P<0.01);小鼠肝组织中PCNA蛋白含量前2 wk明显下降,第2周时达到最小值,第3周较第2周增加显著,差异有统计学意义(P<0.05).第4周与第3周变化无明显差异.结论:在酒精诱导小鼠肝脏损伤的过程中,肝脏胶原纤维的变化规律是先增加后减少,变化明显;PCNA的表达出现显著动态变化,二者均可能与肝脏的损伤修复机制密切相关.
目的探究小鼠酒精性肝损伤中的病理表现.方法健康昆明小鼠♂30只,随机分为对照组(n=10),模型组(n=20),对照组于0 wk处死,取肝脏;模型组进行适应性喂养1 wk后,给予56度白酒灌胃(0.15 m L/20 g·d),连续8 w k,于4 wk和8 wk,颈椎脱臼处死小鼠,取其肝脏待用,制备石蜡切片和冰冻切片,采用HE染色和油红O染色,观察酒精性肝损伤中的脂滴表达变化,采用Image-Pro Plus6.0对病理切片样本进行累计光密度(integral optical density,IOD)定量分析.结果与对照组比较,第4周脂滴含量开始增加(20.29±7.07 vs 8.06±2.06,P<0.01),第8周末脂滴含量明显增多(34.88±15.33 vs 8.06±2.06,P<0.01),8 wk与4 wk相比,脂滴的表达量呈上升趋势(34.88±15.33 vs 20.29±7.07,P<0.05).结论 8 wk末成功建立了酒精性脂肪肝模型,可以用来评估酒精性脂肪肝治疗药物的预后作用;在小鼠酒精性肝损伤中,随着脂肪变性的发生,脂滴含量不断增加.
目的:探讨热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)在小鼠酒精肝损伤过程中的变化规律及意义.方法:将50只♂小鼠随机分为两组,对照组(n=10)和模型组(n=40).对照组小鼠正常饲养处死取肝脏;模型组小鼠连续4 wk白酒灌胃(0.05 m L/10 g),每天1次,并分别在第1、2、3、4周各用小鼠5只取肝脏.将所得肝脏分别处理做组织切片染色观察小鼠肝脏组织病理变化以及用Western blot法检测小鼠酒精肝损伤过程中HSP70含量的动态变化.结果:在小鼠酒精性肝损伤过程中,模型组小鼠第1周HSP70的表达量明显高于对照组(P<0.05),并在第2周达到最高峰(P<0.01),随后HSP70表达量开始下降;在第3周时,H S P70的表达量仍比对照组高(P<0.05);但在第4周时小鼠HSP70的表达量却明显低于对照组(P<0.05).HE染色显示,与对照组相比,模型组中小鼠肝组织中炎细胞浸润增加,肝细胞的脂肪变、气球样变也明显增多,甚至在第4周时肝组织中出现了点状坏死.结论:小鼠酒精肝损伤过程中HSP70的表达量有明显的动态变化规律,与小鼠肝脏损伤程度变化一致,表明HSP70表达与小鼠酒精性肝损伤过程中的保护作用密切相关.
