魏学辉
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金陕西省社会发展科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)R132H突变型脑胶质瘤细胞的原代培养及鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的:建立简单、方便、高效的异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变型胶质瘤原代细胞体外培养方法,为研究IDH1突变型脑胶质瘤提供细胞模型。方法:样本组织取自低级别脑胶质瘤手术患者,采用组织块法行原代细胞培养,倒置显微镜下观察细胞形态特点;瘤组织应用苏木精-伊红染色法(HE)和免疫组织化学染色确定胶质瘤病理类型以及级别;原代细胞提取基因组行碱基序列测序以鉴定IDH1突变类型;采用MTT法绘制生长曲线,检测IDH1突变型细胞的体外增殖特性。结果:成功建立WHOⅡ级IDH1 R132H突变型人脑星形胶质细胞瘤细胞株,并可传代。结论:应用合适的方法以及培养液,可以培养出IDH1 R132H突变型人脑胶质瘤原代细胞。
- 张耀茹懿魏学辉王秦豪张梅李霞林伟
- 关键词：人脑胶质瘤异柠檬酸脱氢酶突变
- DEC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其稳转胶质瘤细胞系的建立被引量：1
- 2017年
- 目的构建人分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并建立稳定敲减DEC1表达的人脑胶质瘤细胞株T98G。方法根据Gen Bank中DEC1基因c DNA序列设计合成两条特异性shRNA序列,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,分别克隆到PsiLVRU6MP质粒载体内,经酶切电泳、DNA测序鉴定后包装成慢病毒颗粒。再以3组慢病毒感染胶质瘤细胞系T98G,用嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察m Cherry的表达,Western Blot检测各组DEC1蛋白的表达水平。结果 DEC1基因shRNA慢病毒表达载体经酶切、测序鉴定证实克隆正确。荧光显微镜检测显示各组细胞均已被慢病毒高效感染。Western Blot结果显示,两干扰组细胞各自DEC1蛋白表达水平明显低于未处理组和阴性对照组,分别占未处理组的39.47%±0.69%和41.17%±0.89%(P<0.05),但两干扰组之间无显著性差异(P>0.05);阴性对照组与未处理组相比亦无明显差异(P>0.05)。结论成功构建DEC1基因shRNA慢病毒表达载体,感染胶质瘤T98G细胞系获得成功。两干扰组慢病毒均能明显敲减目的基因DEC1的表达,为进一步研究DEC1在胶质瘤细胞系T98G中的生物学功能和作用机制提供了实验基础。
- 魏学辉李晓明张耀茹懿王秦豪李霞林伟
- 关键词：短发卡RNA慢病毒表达载体胶质瘤
