李晨
- 作品数：13 被引量：44H指数：4
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金贵州省科技创新人才团队建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 敲除小RNA gcvB后沙门菌的转录组分析被引量：2
- 2019年
- 为筛选与沙门菌小RNA gcvB相关的靶基因,采用高通量的转录组测序(RNA-seq)技术对野生型沙门菌和敲除小RNA gcvB沙门菌的mRNA进行对比分析,全面地预测GcvB的靶基因的数量与种类,通过GO和KEGG数据库对筛选基因进行比对注释,进一步分析筛选基因的主要功能及涉及的生物过程。并利用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证。结果显示:差异表达基因共1 244个,其中基因表达上调678个,基因表达下调566个。GO富集分析显示,差异表达基因主要涉及氧化还原活性、铁离子结合、运动活性等分子功能,细菌鞭毛的细胞成分,细胞呼吸、钴胺素代谢过程和钴胺素生物合成过程等生物过程。KEGG数据库分析显示,差异表达基因主要参与细菌趋化性、卟啉和叶绿素代谢、不同环境中的微生物代谢、双组分系统、甲烷代谢等14个信号通路。对筛选出的10个差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果显示:差异表达基因相对表达量与RNA-seq测序结果基本一致。本研究为进一步探明小RNA gcvB与靶基因相互作用、小RNA的调控机制,以及沙门菌致病机制奠定了基础。
- 刘丽娟董然然董然然程振涛王开功温贵兰程振涛文明温贵兰
- 关键词：沙门菌转录组测序靶基因
- 腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究被引量：12
- 2017年
- 为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地(州)市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。
- 李晨张双翔周碧君程振涛文明马光强王伟胡兴义张海丁尊俄王开功
- 关键词：大肠埃希氏菌沙门氏菌耐药性
- sRNA伴侣蛋白Hfq敲除条件下沙门菌的转录组分析被引量：6
- 2019年
- 为探明沙门菌(Salmonella)在sRNA伴侣蛋白Hfq敲除条件下转录组变化情况。本试验采用HiSeq测序平台对沙门菌LT2菌株及其Hfq敲除株进行高通量测序,通过DESeq2差异分析方法筛选敲除sRNA伴侣蛋白Hfq条件下的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能显著性富集分析和Pathway显著性富集分析。结果显示,对照组和试验组分别得到12 753 534条、8 254 308条Clean Reads。通过DESeq2差异分析获得差异基因1 055个,其中表达上调基因516个,表达下调基因539个。GO功能显著性富集分析表明显著差异表达基因主要富集在钴胺素代谢过程、钴胺素生物合成过程、碳水化合物代谢过程等生物过程中。Pathway显著性富集分析表明显著差异表达基因富集到细菌趋化性、丙酸代谢和碳代谢等11个信号通路中。结果表明,本试验应用RNA-seq技术丰富了sRNA伴侣蛋白Hfq调控基因数量,筛选出20个受伴侣蛋白Hfq调控的显著差异表达基因,其中4个基因功能及编码蛋白未知,注释了差异表达基因的生物学功能及信号通路,推断Hfq在细菌对数期主要通过影响营养提供和趋化性等途径,继而影响细菌的正常生理活动,为Hfq协同sRNA的调控机理研究及sRNA靶基因的筛选奠定了基础。
- 李晨王开功周碧君周碧君刘丽娟文明
- 关键词：沙门菌转录组测序
- 贵州某鸡场一株鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定
- 管国丹温贵兰李晨陈绍品林汉卿
- 猪病毒性腹泻弱毒疫苗与灭活疫苗联合使用的免疫效果评价被引量：3
- 2017年
- 为研究猪病毒性腹泻弱毒疫苗与灭活疫苗联合使用的免疫效果,本实验应用"猪流行性腹泻病毒(PEDV)-猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)-猪轮状病毒(PoRV)三联弱毒疫苗"和"PEDV-TGEV二联灭活疫苗"对100头妊娠母猪和所产140头仔猪进行不同免疫,在不同日龄对仔猪前腔静脉采血并离心取上清,利用直接ELISA方法测定其免疫抗体滴度。结果表明,妊娠母猪于产前40 d首次免疫和产前20 d二次免疫,所产仔猪3日龄滴鼻接种三联弱毒疫苗,28日龄二次免疫和65日龄三次免疫后14 d,抗体滴度开始上升。通过本实验基本分析猪病毒性腹泻疫苗母源抗体和免疫抗体水平的消长规律,为猪病毒性腹泻疫苗免疫程序提供理论参考。
- 胡兴义张双翔王开功王燕周碧君文明程振涛张海李晨秦文学王跃章王逊之李如举
- 关键词：ELISA检测猪病毒性腹泻弱毒疫苗灭活疫苗免疫效果评价
- 基于倒毛鸡LSm14A分子序列分析的原核表达与免疫原性分析
- 2016年
- 旨在探明倒毛鸡LSm14A分子序列特征与免疫原性。通过提取倒毛鸡肝总RNA,经RT-PCR分别扩增倒毛鸡LSm14A全长CDS区与原核表达片段;采用分子生物学技术构建携带倒毛鸡LSm14分子的原核表达质粒;经IPTG诱导表达、His-tag镍柱纯化表达的重组蛋白质;纯化重组蛋白质rHis-cLSm14A分别免疫小鼠与兔制备相应的多克隆抗体;采用间接ELISA与Western blotting方法分析表达蛋白质的免疫原性。结果显示:倒毛鸡LSm14A全长CDS为1 386bp,与原鸡源LSm14A相似性达100%,与鸭源的LSm14A相似性为95.1%;与鼠、爪蟾、猴、人、猪、鹅源的LSm14A相似性相对较低;鼠源、兔源抗cLSm14A多克隆抗体ELISA效价均高于1∶3 200;Western blotting结果显示,重组表达蛋白质分别被His抗体、鼠源与兔源抗cLSm14A多克隆抗体所识别,蛋白质条带大小约为19.6ku。以上结果说明倒毛鸡源LSm14A分子具有较高的保守性与良好的免疫原性,研究结果为研究倒毛鸡的生物学特性与宿主的抗病毒天然免疫机制奠定了基础。
- 伍昌华陈绍品温贵兰李晨李天珍林汉卿管国丹王开功文明龚新勇
- 关键词：免疫原性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株E11105 N基因的序列分析与原核表达被引量：1
- 2016年
- 为研究PRRSV N蛋白的结构、功能以及N蛋白在病毒致病中的作用,以临床分离PRRSV毒株E11105为研究对象,采用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物,经RT-PCR扩增出N基因片段,利用相关分子生物学软件对N基因序列进行分析;将N基因克隆连接到pColdⅠ原核表达载体上,经PCR、双酶切鉴定及序列测定后,得到重组质粒pColdⅠ-N,将pColdⅠ-N转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot验证分析。结果显示,分离株E11105N基因与北美洲型代表株VR-2332、欧洲型代表株Lelystad virus(LV)、中国2006年暴发的高致病性PRRSV代表株JXA1、中国代表株CH-1a的核苷酸序列同源性分别为93.3%、34.7%、99.2%、95.4%,氨基酸序列同源性分别为94.4%、15.3%、94.4%、99.2%;系统进化树显示,E11105株N基因与美洲型代表株VR-2332、中国高致病性JXA1毒株的亲缘关系较近;分离株E11105N基因所编码蛋白不存在跨膜区;二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占20.33%和63.41%;预测该蛋白可能存在5个较为明显的B细胞优势抗原表位。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明,重组N蛋白主要存在于菌体沉淀中,分子质量约为16.7ku;Western blot结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单克隆抗体识别,显色后条带约为16.7ku,与SDS-PAGE蛋白电泳的条带大小一致。
- 张升波陈绍品温贵兰伍昌华李天珍李晨王开功文明龚新勇
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达
- 贵州省某猪场体表脓肿病原菌的分离鉴定及药敏分析被引量：6
- 2020年
- 为探明贵州省某猪场引起猪体表脓肿的原因,本研究对该猪场脓肿部位的脓汁进行细菌分离培养,并对分离所得的细菌进行革兰氏染色镜检、生化试验、药敏试验、16S rDNA序列分子分析及动物感染试验。结果显示,从脓汁中成功分离到了3株菌落形态不一的菌株,分别为金黄色葡萄球菌、化脓隐秘杆菌、停乳链球菌类马亚种,根据分离地点和时间将其分别命名为GZGP2018-1、GZGP2018-2和GZGP2018-3;GZGP2018-1菌株与NCBI上金黄色葡萄球菌的同源性高达99.9%,GZGP2018-2菌株与NCBI上化脓隐秘杆菌的同源性高达99.9%,GZGP2018-3菌株与NCBI上停乳链球菌类马亚种的同源性高达100%;3株分离菌株对头孢拉定、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶和氟苯尼考较敏感,对青霉素类药物和红霉素耐药;3株分离菌株对试验小鼠均具有致死性。本研究为该猪场猪体表脓肿的发病原因、实验室诊断方法及日常防控提供了理论参考。
- 张天天王壬琦陈路铭罗芹蒲翠敏刘丽娟李晨王开功
- 关键词：脓肿化脓隐秘杆菌链球菌
- 猪流行性腹泻研究进展被引量：3
- 2019年
- 文章通过对猪流行性腹泻的发展史、病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防治进行概述,为猪流行性腹泻的科学防控提供参考。
- 田琴李晨蒲翠敏周怡张明华周碧君程振涛文明程振涛
- 关键词：猪流行性腹泻病原学流行病学
- 贵州中华蜜蜂养殖存在的问题及发展建议被引量：6
- 2019年
- 为保障贵州中华蜜蜂养殖业健康可持续发展,通过对遵义市、安顺市、黔东南州等地区蜂场实地调研发现,多地存在盲目引种,导致贵州中华蜜蜂严重种间杂交、蜂群群势下降、采集能力降低、攻击力增强。提出贵州中华蜜蜂种质保护和利用措施,通过加强蜂农养蜂技术培训,杜绝外地引种,同时建立地方品种繁育基地,最终建立净化的贵州中华蜜蜂种群。
- 张明华田琴周怡李晨蒲翠敏周碧君程振涛文明程振涛
- 关键词：中华蜜蜂引种
