夏明哲
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：青海大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青海省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 黄绿蜜环菌SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选被引量：7
- 2013年
- 以CTAB法提取的黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens)DNA为模板,应用L16(45)正交实验设计,对Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶、模板浓度5种因素进行SSR-PCR反应体系优化,建立了适合黄绿蜜环菌SSR-PCR反应的最佳体系并对退火温度进行检测。结果表明:在15μL反应体系中包括:1×PCR Buffer,100ng模板DNA,dNTPs 217μmol/L,引物0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶0.75U,Mg2+1.3mmol/L。稳定性检测证明,该反应体系具有较高的稳定性和重复性,并从34对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物8对。该体系的建立为今后利用SSR标记对黄绿蜜环菌遗传多样性研究、亲缘关系分析及种质资源鉴定等研究提供了依据。
- 李颖谢占玲田飞贾贤卿方慧夏明哲
- 关键词：黄绿蜜环菌SSR-PCR正交设计引物
- 低氧胁迫下花斑裸鲤(Gymncypris eckloni)血红蛋白和肌红蛋白基因表达模式研究
- 花斑裸鲤(Gymncypris eckloni)对高原环境表现出极强的适应性.本研究采用RT-PCT和RACE技术获得了血红蛋白α-珠蛋白(HbA)和β-珠蛋白(HbB)全长cDNA序列,以及肌红蛋白(Mb)编码序列.结...
- 夏明哲孔庆辉晁燕祁得林
- 关键词：血红蛋白肌红蛋白基因克隆低氧胁迫
- 黄河裸裂尻鱼肌酸激酶M-CK cDNA的克隆及组织表达分析被引量：3
- 2016年
- 肌酸激酶(CK)能够催化磷酸基在二磷酸腺苷(ADP)和磷酸肌酸之间的可逆性转移,在细胞能量代谢过程中发挥重要作用。本研究利用RT-PCR和RACE方法克隆了黄河裸裂尻鱼(Schizopygopsis pylzovi)肌酸激酶基因全长c DNA序列,并进行了生物信息学分析和系统发育关系研究。黄河裸裂尻鱼肌酸激酶c DNA全长1 599 bp,开放阅读框(ORF)1 143 bp,编码380个氨基酸,具有典型的N-端结构域和C-端催化结构域。氨基酸序列同源性分析表明,黄河裸裂尻鱼肌酸激酶与斑马鱼(Danio rerio)和鲤(Cyprinus carpio)M3-CK有较高的同源性,其序列一致度达94%以上。系统发育分析显示,黄河裸裂尻鱼肌酸激酶与斑马鱼和鲤的M3-CK聚在一支,形成一个单系群,初步判定克隆获得的黄河裸裂尻鱼肌酸激酶基因可能与鲤和斑马鱼M3-CK是直系同源基因。利用Real-time PCR方法检测和分析了黄河裸裂尻鱼主要组织肌酸激酶m RNA表达水平,肌肉、肠、眼、心中肌酸激酶转录本表达较高,在肝胰脏和脑中表达微弱。肌酸激酶在肌肉、肠、和心中高表达与其能量代谢功能相适应,而在眼组织中的高表达是否与肌酸激酶的其他功能相关,有待于进一步研究。
- 孔庆辉晁燕夏明哲李长忠祁得林
- 关键词：肌酸激酶基因克隆
- 黄河裸裂尻鱼珠蛋白家族成员的基因结构特征及其在低氧适应中的作用
- 青藏高原水体环境具有溶氧量低且因时空、季节性和水体环境不同而波动较大的特点，经过长期的适应进化，高原土著裂腹鱼亚科鱼类形成了特有的适应机制来应对抗缺氧的极端高原环境。本研究采用新一代测序技术确定了黄河裸裂尻鱼珠蛋白家族的...
- 夏明哲
- 关键词：基因克隆低氧适应
- 文献传递
- 黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)的表达,评估MSTN基因的沉默效果,并检测RNA干扰后对下游基因的影响。方法通过构建黄河裸裂尻鱼(Schizopygopsis pylzovi)MSTN基因RNA干扰(RNAi)重组腺病毒载体1P3(DSP MSTN 273+250+1737)和1P2(DSP MSTN 195+1670),并将其注射黄河裸裂尻鱼肌肉组织,进行活体RNA干扰;利用real-time PCR和Western blotting评估MSTN基因的沉默效果,并检测MSTN基因RNA干扰后肌肉肌酸激酶(muscle-type creatine kinase,M-CK)基因转录水平的调控作用。结果real-time PCR分析结果表明,与HK组(病毒通用阴性对照组)和N组(空白对照组)相比,重组腺病毒载体1P3对黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用(P<0.05),抑制率达53.5%;而重组腺病毒载体1P2对MSTN基因的转录无明显干扰作用(P>0.05)。Western-blotting分析结果与real-time PCR结果相一致。同时,经1P3干扰后随着MSTN基因转录水平的下降,其肌肉肌酸激酶M-CK基因表达水平显著上升。结论通过RNAi技术能够有效的抑制MSTN基因的表达,并能够上调M-CK基因的表达量。因此,证明了在黄河裸裂尻鱼中MSTN能够抑制M-CK的转录。揭示高原土著鱼类MSTN基因的对肌肉的生长发育起到调控作用。
- 孔庆辉晁燕夏明哲祁得林
- 关键词：RNA干扰肌酸激酶
