董丹
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：淮海工学院海洋学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划江苏省海洋生物技术重点建设实验室基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 鳗弧菌溶血毒素基因vah4的克隆及表达被引量：2
- 2009年
- 目的:对鳗弧菌溶血毒素基因vah4进行克隆与原核表达,为进一步深入研究其免疫原性及VAH4的功能奠定基础。方法:PCR扩增vah4,将扩增的产物连接于测序载体pMD18—T上,经测序反应确定无误后,再将PCR产物与原核表达载体pET-32a构建表达VAH4的重组质粒(pET-32a-VAH4),经PCR鉴定后,再转入表达宿主大肠杆菌BL21菌株内,对转化菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果:含重组质粒的菌株有表达蛋白,其表达的蛋白质相对分子质量为40kDa,并经Western blot鉴定结果证实该条带即VAH4-His融合蛋白。结论:vah4基因成功克隆至pET-32a质粒内并成功表达,为进一步研究其免疫原性、VAH4的毒性作用效果及作用机制奠定基础。
- 阎斌伦许冰董丹王洪斌
- 关键词：鳗弧菌克隆原核表达
- 松果提取物的体外抗腺病毒活性研究被引量：6
- 2011年
- 用95%的乙醇沸腾回流提取,制备松果提取物。MTT法确定提取物对细胞的最大无毒浓度;用梯度滴定法观察腺病毒所携带的绿色荧光蛋白基因的蛋白表达量确定病毒液的效价(TCID50);参照所得数据,设计3个松果提取物潜在的抗腺病毒靶位,分别探究松果提取物对腺病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的抑制作用和对病毒生物合成的抑制作用。结果表明,试验所用腺病毒原液感染HEK293细胞的效价为106.1 TCID50/mL;乙醇溶剂和松果提取物均对腺病毒具有直接灭活作用,但提取物可以加强这种灭活作用;两者对于腺病毒的吸附并不起什么作用;松果提取物能够抑制腺病毒的生物合成作用,而且该抑制效果较乙醇更为显著。
- 王洪斌董丹许冰周向红阎斌伦
- 关键词：抗病毒作用腺病毒MTTTCID50
- 蓖麻毒素A链基因的克隆表达、纯化及其活性被引量：5
- 2010年
- 为了实现蓖麻毒素A链基因（rta）的克隆表达,制备有高生物活性的重组蓖麻毒素A链蛋白（RTA）,借助重组腺病毒介导表达的RTB进入细胞,发挥RTA的细胞毒作用,检测其活性。重组质粒pET32a-His-RTA能正确表达RTA融合蛋白,相对分子质量约47 000,每升细菌培养物回收约50 mg的纯化蛋白质,在有RTB表达的系列中,细胞死亡率明显上升,最高可达50%-60%。说明利用pET32a表达系统可以快速获得大量有高生物活性的可溶性RTA融合蛋白质。以腺病毒为载体表达RTB可以帮助RTA进入细胞,对细胞发挥毒性作用。
- 王洪斌董丹许冰周向红阎斌伦
- 关键词：蓖麻毒素RTARTB细胞杀伤
