席文锦
- 作品数：23 被引量：60H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的表达及活性鉴定
- 2016年
- 目的构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化后,对其生物学活性进行鉴定。方法将人源性抗PSMA sc Fv的基因克隆入原核表达载体p ET302,将其转化入大肠杆菌BL21后用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,摸索不同诱导条件使sc Fv呈可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot法确认表达后,利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。利用流式细胞术检测sc Fv与PSMA阳性和阴性细胞的结合情况。结果成功构建人源性抗PSMA sc Fv的原核表达载体;在30℃、IPTG终浓度为0.05 mmol/L时,可实现目的蛋白的可溶性表达;经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后获得纯度较高的抗PSMA sc Fv蛋白;流式细胞术结果显示该sc Fv可与PSMA阳性的LNCa P前列腺癌细胞特异性结合,而不与PSMA阴性的PC-3细胞结合。结论在大肠杆菌成功表达了可溶性人源性抗PSMA sc Fv,获得的抗PSMA sc Fv能够特异性地与PSMA阳性前列腺癌细胞结合。
- 韩东晖吴介恒欧阳清魏铭席文锦杨安钢温伟红秦卫军
- 关键词：单链抗体原核表达
- 组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)抑制人脐静脉内皮细胞增殖及侵袭和迁移被引量：3
- 2016年
- 目的分析组蛋白特异性去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞周期、凋亡和迁移的影响。方法合成JMJD3的小干扰RNA(siRNA)、构建JMJD3过表达载体;阴性对照siRNA、si JMJD3或质粒p MSCV-PIG、p MSCV-JMJD3转染HUVEC 48 h后,通过荧光实时定量PCR检测JMJD3 mRNA的水平;流式细胞术检测各转染组HUVEC的细胞周期与凋亡的变化;TranswellTM实验和划痕实验检测转染后的HUVEC侵袭和迁移能力的变化。结果 HUVEC转染si JMJD3 48 h后JMJD3的表达水平下降,S期细胞增加、而G1期细胞明显减少。下调JMJD3后HUVEC的增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞侵袭、迁移能力增强。而在HUVEC转染JMJD3过表达质粒MSCV-JMJD3 48 h后,细胞内JMJD3水平增加,S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增加,同时HUVEC的增殖能力受到抑制,细胞凋亡增多,细胞侵袭和迁移能力减弱。结论 JMJD3具有抑制HUVEC增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡的作用。
- 李玉芳胡萍萍陈旭席文锦王微霍毅杨安钢王涛
- 关键词：细胞增殖
- 实验性自身免疫性脑脊髓炎中B7-H1分子在脾脏和中枢神经系统淋巴细胞上的表达变化
- 2012年
- 目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用。方法:以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分。分别于发病前和发病高峰期处死小鼠,分离脾脏与中枢神经系统中的淋巴细胞,用流式细胞术分析淋巴细胞表面B7-H1分子的表达差异。结果:与发病前相比,EAE发病高峰期脾脏分离的淋巴细胞中B7-H1阳性细胞率由(35.1±2.46)%下降至(18.9±2.06)%(P<0.01),其中CD4+T细胞中B7-H1阳性细胞由发病前的(6.4±1.25)%下降至发病后的(2.3±1.04)%(P<0.05)。中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有8.7%为B7-H1阳性细胞。结论:在EAE发病过程中,B7-H1分子在外周淋巴细胞的阳性细胞数下降,而中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有一定比例的B7-H1阳性细胞,提示B7-H1可能在EAE发病过程中发挥重要作用。
- 史圣甲席文锦王丽娟郭张燕王曦皇甫罗凯王国栋杨安钢温伟红
- 关键词：B7-H1EAECD4+T细胞
- 免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性杀伤HER2阳性SGC-7901胃癌细胞被引量：1
- 2016年
- 目的构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性。方法把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉毒素弗林蛋白酶识别位点(fdt)、caspase-6以及免疫球蛋白Ig G Fc段基因重组,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,命名为pc DNA3.1(+)-AFC。瞬时转染CHO-S细胞,Western blot法检测上清中目的蛋白的表达;收集培养上清并利用蛋白A纯化柱对目的蛋白进行纯化;流式细胞术验证目的蛋白对HER2阳性SGC-7901细胞的杀伤作用。结果成功构建pc DNA3.1(+)-AFR真核表达载体;瞬时转染悬浮CHO-S细胞后,Western blot法证实目的蛋白可分泌性表达于细胞培养上清中,流式细胞术结果显示纯化后的目的蛋白可以显著促进HER2阳性SGC-7901细胞凋亡。结论真核细胞表达的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性高效杀伤HER2阳性SGC-7901细胞。
- 胡萍萍任君琳李玉芳陈旭席文锦杨安钢王涛崔立红
- 关键词：分子靶向治疗
- MiR-200c通过靶向转录抑制因子ZEB1和锌指蛋白ZNF217调控乳腺癌转移与赫赛汀耐药
- 研究背景:乳腺癌已经成为威胁女性健康的最重要的恶性疾病。赫赛汀(trastuzumab,曲妥珠单抗)是靶向人表皮生长因子受体(human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2)的人...
- 白文栋叶星明张梦瑶朱华宇席文锦贾林涛杨安钢
- 关键词：乳腺癌
- 文献传递
- HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。
- 席文锦彭红艳白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢
- 关键词：原核表达
- 过表达前列腺特异性膜抗原和荧光素酶的PC3稳定细胞系的建立及成瘤性鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的利用慢病毒感染的方法建立能稳定表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)和荧光素酶的PSMA^+-PC3细胞系,并将其接种到裸鼠皮下检测其成瘤能力。方法包装表达PSMA的慢病毒和表达荧光素酶的慢病毒,将其感染PC3细胞后,用嘌呤霉素进行筛选,建立能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA--PC3细胞;利用流式细胞术检测PSMA的表达情况。将PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3细胞接种于裸鼠皮下建立荷瘤模型,利用生物发光成像法观察其在体内的成瘤情况,利用免疫组织化学染色法检测PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3肿瘤组织中PSMA的表达情况。结果成功建立了能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA^- -PC3细胞,流式细胞术检测证实PSMA^+ -PC3细胞上PSMA呈阳性表达,小动物活体成像结果显示PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3细胞均可有效成瘤,免疫组织化学染色检测证实PSMA^+ -PC3肿瘤上PSMA的表达为阳性。结论成功建立了能稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞系,并在裸鼠体内证实其可有效成瘤,为靶向PSMA的研究提供了有用的细胞和动物模型。
- 张玲玲吴介恒韩东晖史圣甲杨发谢品席文锦郭张燕秦卫军杨安钢温伟红
- 关键词：PSMA
- 封闭负压引流促进猪腹部爆炸伤创面愈合的实验研究被引量：15
- 2014年
- 目的探讨在猪腹部爆炸伤合并内脏外露时,使用封闭负压引流(VSD)控制腹腔、创面感染的作用以及对腹部爆炸创面愈合是否有促进作用。方法爆炸伤导致的全层腹壁缺损的动物随机分为实验组(VSD组)和对照组(盐水纱布组),实验组在6 h清创后置入压力为-125 mmHg VSD装置;对照组在6 h清创后使用盐水纱布覆盖爆炸创面,常规换药治疗。分别采集治疗前6 h和治疗后1、3、5、7 d的创面肌肉组织进行细菌检测,分析2组的细菌量;ELISA检测伤后1、3、5、7 d的腹部引流液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1)、IL-6的表达水平;采集2组治疗后第7天的皮肤、肌肉组织标本,用实时定量PCR分析血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)相对表达量。结果 VSD组在治疗后1、3、5、7 d创面的细菌数(CFU/g)明显少于对照组,两组比较有统计学差异(P<0.01)。猪腹部引流液中TNF-α,IL-1,IL-6的表达量在伤后治疗第1天两组没有显著性差异,在第3、5、7天VSD组明显低于同时间对照组,三个时间点两组比较均有显著性差异(P<0.01)。VSD组在第7天皮肤软组织中VEGF、EGF、bFGF的表达量均高于对照组(P<0.01),但MMP-9的表达无明显差异(P>0.05)。结论 VSD可以有效控制创面的细菌量,减少腹腔引流液中TNF-α、IL-1、IL-6的表达量,促进创面生长因子表达。
- 师俊莉席文锦易成刚王志军郭树钟韩岩
- 关键词：封闭负压引流细胞因子创面愈合
- E盒锌指结合蛋白1基因沉默抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡被引量：3
- 2014年
- 目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测siRNA对ZEB1的抑制效果;利用MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,针对ZEB1的siRNA可在mRNA和蛋白水平有效抑制ZEB1的表达,ZEB1的表达下调可有效抑制HCT116细胞的增殖,并促进细胞凋亡。结论 ZEB1对结肠癌细胞的生存和增殖具有重要作用,可能参与结肠癌的发生发展过程。
- 郑国旭史圣甲魏铭席文锦郭张燕杨帆孟艳玲温伟红杨安钢
- 关键词：结肠癌细胞增殖
- 下调婆罗双树样基因4(SALL4)表达水平可抑制肾癌ACHN细胞周期并促进其凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的探讨下调婆罗双树样基因4(SALL4)对肾癌ACHN细胞周期和细胞凋亡的影响。方法根据人SALL4的mRNA序列设计合成靶向SALL4的小干扰RNA(siRNA),用于沉默ACHN细胞SALL4的表达。运用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测SALL4的mRNA与蛋白表达水平;使用流式细胞术检测ACHN细胞的细胞周期和细胞凋亡情况。结果 SALL4 siRNA可显著下调ACHN细胞中SALL4的mRNA和蛋白表达水平,下调SALL4后ACHN细胞的细胞周期受到抑制,G1期细胞增多,S/G2期减少,细胞凋亡显著增加。结论下调SALL4基因表达可抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进其凋亡,SALL4可能是肾癌治疗的新靶点。
- 孙进波席文锦赵智凝霍毅陈旭王微王涛王禾
- 关键词：SALL4肾细胞癌细胞增殖
