黎卓键
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin的原核表达及其活性测定被引量：1
- 2013年
- 本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性。首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3C-SUMO/Harobin重组质粒。重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体。将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白。复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白。进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性。结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90%纯度的融合蛋白;经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性。
- 董濠鋆张敏仪黎卓键吴国艺麦迪思沈巍徐明芳陈小佳
- 关键词：SUMO原核表达蛋白纯化
- 带有组氨酸标签的蛇毒基因在毕赤酵母中的表达
- 2011年
- [目的]通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达带有组氨酸标签的蛇毒基因。[方法]利用基因重组技术,以海蛇基因为材料,通过PCR技术在N末端添加一个六聚组氨酸纯化标签,并将重组质粒导入菌株GS115,用1%甲醇诱导后,分泌表达了重组蛋白。[结果]测序结果显示该标签已成功插入,SDS-PAGE检测到分子量为28.5 kD的目的蛋白。[结论]成功表达了带有组氨酸标签的蛇毒蛋白,其具有良好的降纤活性。
- 黎卓键
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
