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王菲菲

作品数：1 被引量：0H指数：0
供职机构：天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室更多>>
发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇蛋白
  • 1篇原核表达
  • 1篇纤维连接
  • 1篇纤维连接蛋白
  • 1篇连接蛋白
  • 1篇抗体
  • 1篇基因
  • 1篇基因表达
  • 1篇癌症
  • 1篇纯化

机构

  • 1篇天津医科大学

作者

  • 1篇王萌
  • 1篇刘民
  • 1篇汤华
  • 1篇李欣
  • 1篇孔鹏洲
  • 1篇苏畅
  • 1篇吴海东
  • 1篇王菲菲

传媒

  • 1篇国际免疫学杂...

年份

  • 1篇2010
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
纤维连接蛋白1的原核表达、纯化及抗体的制备
2010年
目的构建人纤维连接蛋白1（FN1）基因的原核表达载体，诱导其表达并纯化该蛋白，制备特异性抗体。方法利用RT—PCR方法扩增人FN1编码序列450bp的片段，包含FN1羧基端的150个氨基酸。构建原核表达质粒pRSETA2-FN1，转化大肠杆菌BL21（DE3），FN1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。融合蛋白通过Ni^2＋-NTA树脂亲和纯化后免疫兔制备抗体血清。蛋白质免疫印迹（Western blot）和免疫组化检测其特异性。结果成功构建重组质粒pRSETA2-FN1，限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序均显示插入片段正确。SDS—PAGE凝胶显示表达的融合蛋白相对分子质量约为20000（FN1-His标签），与预期结果一致。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体效价约为1：10000，Western blot显示可以特异性地检测出人血浆和肝癌细胞系HepG2全细胞裂解液中相对分子质量约250000的纤维连接蛋白。免疫组织化学可显示FN1在正常肺及肺癌组织中的特异性分布。结论成功地原核表达了FN1C-末端蛋白，并免疫获得了抗FN1特异性抗体。
王菲菲苏畅吴海东王萌孔鹏洲刘民李欣汤华
关键词：纤维连接蛋白基因表达抗体癌症
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