李小芳
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组抗菌肽S-thanatin的表达纯化及不同MIC鉴定方法对其结果的影响
- 2011年
- 目的:获得重组抗菌肽S-thanatin(Ts)在大肠杆菌的可溶性表达及分离纯化方法,通过不同方法鉴定Ts的最低抑菌浓度(MIC),揭示不同方法对结果的影响。方法:利用基因重组手段构建表达质粒pET32a-Ts,转化大肠杆菌BL21(DE3),可溶性表达Ts融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,透析以后经凝血酶酶切,再通过葡聚糖凝胶G-50纯化除去融合伴侣TRX,最后冻干精制得到Ts冻干粉。利用玻璃管的常量肉汤稀释法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法和MH琼脂打孔法测定阳离子肽Ts的抑菌活性。结果:Ts在大肠杆菌中成功可溶性表达并获得85%以上纯度的目的蛋白。不同测定方法显示,Ts对同一菌株具有不同的MIC,以常量肉汤稀释法和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法测定的多肽抑菌活性效果最佳。结论:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高表达,纯化出后具有较高的抑菌生物活性。不同方法测定出差异化MIC表明,阳离子肽Ts的抑菌活性易受实验材料材质影响。
- 李小芳邓学鹏王西勇薛秀蕾王升兰沈子龙奚涛吴国球
- 关键词：大肠杆菌表达纯化抗菌活性
- 两种方法测量抗菌肽s-thanatin大鼠体内血药浓度的结果比较被引量：2
- 2011年
- 目的:分别用间接竞争ELISA法和放射性同位素标记法测定不同时间点抗菌肽s-thanatin(Ts)在动物体内的血药浓度变化,比较两种方法测量结果的差异并分析原因。方法:制备Ts的多克隆抗体,分离纯化多克隆抗体并建立间接竞争ELISA方法的标准曲线。用125I对Ts进行标记,制作同位素标记法的标准曲线。18只SD大鼠随机分为3组,分别按20、10和5 mg.kg-1的剂量尾静脉注射给药(放射性同位素标记法中注射Ts为125I-Ts),于给药后不同时间点眼眶取血,分别用两种方法测定动物体内血药浓度,计算药物半衰期。最后,比较两种方法测量结果的差异,并对其进行分析。结果:间接竞争ELISA法测得Ts在动物体内的半衰期为1.5 h左右,而用放射性同位素标记法测得的半衰期为6 h左右。放射性同位素法测得的生物利用度大约为间接竞争ELISA法的20倍。结论:同位素示踪法测得的药物浓度为动物体内药物代谢物的总量,因此需要借助其它分析仪器才能进行准确的定量试验。
- 王升兰李小芳王西勇邓学鹏吴国球沈子龙奚涛
- 关键词：ELISA法放射性同位素标记血药浓度
