何凤明
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：云南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 灯盏花MYB基因克隆及其荧光表达载体的构建被引量：4
- 2017年
- 目的克隆灯盏花MYB基因的全长序列,为解析灯盏花MYB基因的功能奠定基础。方法根据灯盏花转录组的相关信息,利用RACE方法从灯盏花中克隆到一个可能参与灯盏花乙素合成的MYB基因,在对其cDNA序列、核苷酸序列的相似性、理化性质、疏水性、跨膜结构、二级结构及三级结构进行分析预测的基础上,对其进行多序列比对并构建系统树。同时,还构建了该基因与绿色荧光蛋白的融合表达载体,并进行了初步转化研究。结果克隆获得灯盏花MYB基因,命名为ebMYB06,其开放阅读框为783 bp,编码260个氨基酸残基,相对分子质量为63 800,理论等电点(p I)为5.18,属稳定蛋白。其蛋白二级结构主要由无规卷曲、α-螺旋和β-折叠构成。根据灯盏花MYB与拟南芥MYB(AtMYB)的系统树比对分析结果,发现ebMYB基因与拟南芥中的AtMYB4、7、32、6、8和AtMYB11、12、111 2亚群的基因聚类,推测所克隆基因在结构或功能上,可能与这两组具有共同性。实验还表明所构建的表达可用于灯盏花的高效转化。结论首次从灯盏花中克隆到可能参与其苯丙烷代谢或环境响应调控的MYB基因。
- 应宇翔何凤明张云峰张培书严胜柒
- 关键词：灯盏花MYB克隆生物信息学
- 灯盏花3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及生物信息分析
- 2024年
- 从灯盏花cDNA中克隆出灯盏花3-O-葡萄糖基转移酶基因(EbUF3GT)并对其序列进行生物信息学分析以预测其功能。根据课题组前期的转录组分析数据,筛选出了灯盏花EbUF3GT基因的部分序列,并利用RACE基因克隆方法,获得灯盏花EbUF3GT基因的全长cDNA,运用生物信息学分析该基因的相似性和同源性、编码蛋白的理化性质,并通过荧光定量PCR检测基因在植物不同部位中的表达情况。结果发现,克隆cDNA的ORF长1 395 bp,编码464个氨基酸,其蛋白分子量51 850.48,理论等电点为5.48。EbUF3GT蛋白由24.78%的α-螺旋(Alpha helix)、22.20%的延伸(Extendedstand)、53.02%的随机卷曲(Random coil)组成,属于GT家族中的B类型且包含PSPG盒的保守序列。灯盏花的EbUF3GT基因与青蒿、艾草亲缘关系较近,属同一个分支,它们的UF3GT具有共同起源。EbUF3GT基因在根、茎、叶、花这几个部位都能表达,尤其在花中的表达量最高,干旱胁迫也会增加它的表达。结论:通过对EbUF3GT研究,为进一步探索EbUF3GT基因在灯盏花类黄酮次生代谢产物合成和调控机制提供了重要的理论依据。
- 莫维淼王梦钦徐达何凤明陈晓波张云峰
- 关键词：灯盏花糖基转移酶黄酮生物信息学
- 利用无菌苗叶片建立黑果枸杞高效繁殖体系
- 2021年
- 试验在对单粒黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)花青素测定的基础上,以黑果枸杞无菌苗为外植体,利用响应面设计Design-Expert软件就激素浓度及C源组合对诱导响应率、愈伤诱导率及植株形成率的影响进行了研究。结果表明,诱导及愈伤诱导的最佳条件为6-BA 0.92 mg/L、NAA 0.45 mg/L、C源组合蔗糖为2.26%;而植株形成率的最佳条件为6-BA 1.15 mg/L、NAA 0.38 mg/L、C源组合蔗糖2.93%。愈伤诱导过程中碳源组合与激素间存在较强的互作,组织切片所采取的诱导途径可能是胚状体再生途径,RAPD检验显示后代的变异率低,表明利用该繁殖体所培育的幼苗后代可维持母系的优良性状。
- 何凤明郭加元申婷马关雪严胜柒张云峰
- 关键词：响应面设计
- 灯盏花CHI基因的再克隆及其绿色荧光蛋白表达载体构建被引量：1
- 2016年
- 根据灯盏花转录组所注释的CHI unigene片段,设计了RACE相关引物,克隆到灯盏花CHI的cDNA全长序列,序列全长717bp,编码238个氨基酸.该氨基酸序列与我们前期所克隆的灯盏花CHI cDNA序列相比,在345、351位点发生了突变,碱基均由C突变为T,两个位点的突变均属于同义突变,编码的氨基酸分别为115、117位异亮氨酸、酪氨酸.同时将CHI基因片段插入到pDM 18-T,构建pDM 18-T-eBCHI中间载体.经测序验证后,根据pBI121-EGFP图谱,设计带有SalI、SpeI酶切位点的引物,以pDM 18-T-eBCHI中间载体为模板,扩增带酶切位点的CHI序列,扩增产物经回收、纯化后与双酶切的pBI121-EGFP链接,构建了重组表达载体pBI121-EGFP-CHI,CHI基因插入植物表达载体pBI121-EGFP的6xHis组氨酸标签与GFP基因间.经SalI、SpeI双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750bp的目的片段,通过进一步测序证明,CHI基因已成功地连接到pBI121-EGFP-eBCHI中.采用电击转化法将重组质粒导入根癌农杆菌GV3101,用叶盘法转化灯盏花叶片,筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和叶绿素荧光成像检测证明,重组基因已成功地转化到灯盏花愈伤组织中.为利用转基因技术研究CHI基因的表达及其亚细胞定位打下基础.
- 木佳应宇翔张云峰何凤明卢开阳官会林严胜柒
- 关键词：灯盏花查尔酮异构酶绿色荧光蛋白
