旨在克隆绵羊Spesp1 c DNA并表达,得到纯化的GST-SPESP1融合蛋白。以绵羊睾丸组织总c DNA为模板,根据Gen Bank公布的绵羊基因组序列设计引物,PCR扩增得到Spesp1 c DNA,构建原核表达重组载体p GEX-Spesp1,将其转化到E.coliBL21中表达,并优化其表达条件,利用SDS-PAGE切胶纯化法得到纯化的融合蛋白,用Western blot鉴定所得融合蛋白。结果表明,经测序,克隆得到的Spesp1 c DNA序列与Gen Bank中预测的c DNA序列对比有两个碱基不同,并造成一个氨基酸的差异。在E.coliBL21中成功表达重组融合蛋白,其最优表达条件为:37℃、4 h、0.005%IPTG终浓度,SDS-PAGE和Western blotting中,融合蛋白位于约64 k D处并可以被抗GST和抗羊SPESP1的抗体识别,与预计相符,表明融合蛋白成功表达。成功纯化得到GST-SPESP1融合蛋白,为研究SPESP1在精卵细胞膜融合中的功能奠定了基础。
