王洪民
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 稳定表达人FcγRⅡA的HEK 293T细胞系的建立及其功能鉴定
- 2016年
- 构建稳定表达FcγRⅡA(CD32a)的人胚肾293T细胞系及其相应的对照细胞系FcγRⅡB(CD32b),FcγRⅡA(Y288F/Y304F)[(CD32a(Y288F/Y304F)],作为进一步研究FcγRⅡA介导的信号通路的基础。首先,从人外周血单核细胞cDNA中扩增CD32a和CD32b,并构建pMSCVegfp-CD32a及pMSCVegfp-CD32b逆转录病毒表达载体。另外,将构建成功的pMSCVegfpCD32a288和304位点的酪氨酸(Y)突变成苯丙氨酸(F),得到pMSCVegfp-CD32a(Y288F/Y304F)表达载体。构建成功的逆转录病毒载体经酶切、测序鉴定后,与pcl-amp辅助载体共同转染HEK 293T细胞进行病毒包装。病毒感染HEK 293T细胞后通过流式分选得到稳定表达CD32a、CD32b、CD32a(Y288F/Y304F)的HEK 293T细胞系,流式检测各细胞株膜表面的CD32分子表达及白色念珠菌考察各细胞株抗体依赖的内吞作用。结果表明:稳定表达CD32a、CD32b、CD32a(Y288F/Y304F)的HEK293T细胞纯度在98%以上,并且膜表面均可检测到CD32的表达。吞噬实验结果表明,HEK 293T-CD32a细胞呈现对白色念珠菌的吞噬作用,而HEK 293T-CD32b、HEK 293T-CD32a(Y288F/Y304F)无吞噬作用。
- 王洪民龚方苑董红亮高晓明
- 关键词：医学免疫学
