王凯
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅科研项目国家教育部博士点基金长春市科技局项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 红花种子cDNA文库构建及脂肪酸代谢相关基因的克隆
- 2015年
- 【目的】构建红花种子cDNA文库,挖掘红花脂肪酸代谢途径相关基因,为红花品质改良的基因工程研究奠定基础。【方法】以红花成熟种子为材料,通过Trizol法,提取红花种子总RNA,使用GeneRacer?Kit和CloneMinerⅡcDNA Library Construction Kit试剂盒构建cDNA文库。并对cDNA文库的重组率和插入片段进行鉴定,从中获得contig和singlet片段及脂肪酸代谢相关基因,通过荧光定量PCR,测定delt-12脂肪酸脱氢酶基因在不同开花时期(14,16,18,20d)红花种子中的表达量。【结果】构建的红花种子cDNA文库总克隆数为7.5×106,重组率>95%,插入片段长度均>500bp,全长基因比例达到20%。从红花cDNA文库中共拼接得到contig 543条,singlet 3 444条。delt-12脂肪酸脱氢酶基因序列在成熟红花种子中的表达量较其他时期高。【结论】成功建立了红花种子cDNA文库,克隆了delt-12脂肪酸脱氢酶基因,且该基因表达量在红花种子成熟过程中逐渐升高。
- 杨莹王沥浩邹德毅王清曼强卫东许心怡陈伟王凯杨晶
- 关键词：CDNA文库克隆
