段海峰
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：北京放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 丹参酮Ⅰ、二甲双胍和阿司匹林联合用药对黑素瘤模型小鼠的抑瘤作用
- 2017年
- 目的研究丹参酮Ⅰ(TanⅠ)、二甲双胍(Met)和阿司匹林(Asp)联合应用对黑素瘤模型小鼠的抑瘤作用及可能机制。方法 C57BL/6小鼠右前腋下sc接种B16F10细胞制备黑素瘤模型。根据体质量分为8组,即模型组、TanⅠ组(20 mg·kg^(-1),ip)、Asp组(210 mg·kg^(-1),饮用)、Met组(70 mg·kg^(-1),饮用)、Asp+Met组、TanⅠ+Asp组、TanⅠ+Met组和TanⅠ+Asp+Met组,每组10只。每只小鼠摄水量约7 m L·d^(-1),连续给药18 d。隔天称量小鼠体质量,每天测量皮下肿瘤直径。给药结束后将小鼠处死,测瘤质量,计算抑瘤率。制备脾和肝组织切片,HE染色观察病理变化。流式细胞术检测肿瘤组织中CD8+T,CD4+T和Treg细胞百分比。ELISA检测肿瘤组织中白细胞介素6(IL-6)、IL^(-1)β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果实验期间,各组小鼠体质量(包括瘤质量)均呈上升趋势;与模型组比较,TanⅠ+Asp+Met组体质量增加减慢(P<0.01)。实验结束时,各组存活小鼠肝和脾组织均未见明显病理改变,小鼠存活数分别为:模型组8/10,TanⅠ组8/10,Asp组7/10,Met组7/10,TanⅠ+Asp组8/10,TanⅠ+Met组8/10,Asp+Met组7/10,TanⅠ+Asp+Met组5/10。与模型组比较,TanⅠ,Asp和Met单用组及两两联用组肿瘤体积和瘤质量无明显变化;TanⅠ+Asp+Met组肿瘤体积和瘤质量较模型组明显降低(P<0.01,P<0.05),抑瘤率为46.2%。与模型组比较,TanⅠ,Asp和Met单用组及两两联用组肿瘤组织中CD8+T淋巴细胞百分比无明显变化,TanⅠ+Asp+Met组CD8+T淋巴细胞百分比增加(P<0.05)。TanⅠ+Met组肿瘤组织中IL-6,IL^(-1)β和TNF-α含量较模型组升高(P<0.01,P<0.05,P<0.05),TanⅠ+Asp+Met组IL-6含量升高(P<0.01)。结论 TanⅠ+Asp+Met联用可抑制黑素瘤模型小鼠肿瘤生长,其机制可能与增加肿瘤组织CD8+T淋巴细胞百分比和IL-6含量有关,但副作用可能性较大。
- 赵亚宁薛冰华秦亚茹吴祖泽段海峰
- 关键词：黑素瘤肿瘤微环境阿司匹林二甲双胍
- 重组质粒pUDKH的质量分析被引量：2
- 2006年
- 目的:分析研究pUDKH的质量。pUDKH是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的真核表达质粒,具有治疗肢体动脉闭塞病的应用潜能。方法:用光密度法分析pUDKH的浓度及纯度;用0.8%琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋pUDKH比例及RNA;以地高辛标记的核酸探针固相斑点杂交法测定残留宿主DNA含量;用酶联免疫法测定残留宿主菌蛋白;以4组限制性内切酶分析一致性;PCR扩增目的基因片段;抑菌圈测定板测定残余抗生素;用鲎试剂检测细菌内毒素;对CHO细胞进行基因转染;ELISA检测上清HGF表达量;用Transwells法分析表达的上清液诱导ECV304细胞迁移数。结果:03批次pUDKH的浓度为1.97mg/mL,D260nm/D280nm值为1.84,超螺旋pUDKH比例为95.5%;电泳图谱中未见RNA;残留宿主DNA含量低于质粒DNA的0.2%;菌体蛋白质残留含量低于质粒DNA的0.1%;限制性酶切图谱与自行制备的对照品一致;PCR扩增到HGF基因片段,长约2.2kb;未见残余抗生素(卡那霉素)抑菌圈;细菌内毒素≤0.03125EU/mL;转染的CHO细胞上清HGF表达量为39.32ng/mL;表达的上清诱导ECV304细胞迁移数高于对照组2倍。结论:03批次pUDKH的质量符合药学规格。
- 张庆林肖凤君毕建进刘红军段海峰劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组质粒基因治疗
- 重组质粒pUDKH工程菌库的制备及检定
- 2006年
- 目的:pUDKH是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的真核表达质粒,具有治疗肢体动脉闭塞病的应用潜能。为了生产制备重组质粒pUDKH,须建立菌种库并对其进行质量检定。方法:将质粒pUDKH转化大肠杆菌DH5α,经筛选后制备成初始菌种库和工作菌种库,对菌种进行革兰染色、电镜、抗生素抗性、遗传稳定性、质粒拷贝数、生化反应等检定。结果与结论:菌种生产pUDKH的产量较高,无支原体及其他微生物污染,40代次内菌种性状、遗传稳定性、质粒拷贝数均稳定,可作为工艺生产用菌种。
- 肖凤君张庆林毕建进段海峰吴祖泽
- 关键词：重组质粒基因治疗检定
- Toll样受体5对间充质干细胞生物学特性的影响
- 2017年
- 目的探讨Toll样受体5(TLR5)对间充质干细胞(MSC)生物学特性的影响,以期探究TLR5在MSC与肿瘤关系中的作用。方法构建过表达TLR5的慢病毒载体并用相关病毒感染MSC,通过荧光表达量、RT-q PCR和Western印迹验证TLR5在MSC中的过表达情况,通过MSC-TLR5增殖、表面抗原和细胞分化来验证TLR5过表达对MSC生物学性状影响,通过检测CBLB502激活TLR5后白细胞介素6(IL-6)和IL-8的表达水平验证TLR5生物学功能。结果 TLR5慢病毒感染MSC后,mRNA水平和蛋白水平检测TLR5表达量均显著升高,MSC-TLR5增殖、免疫表型和分化能力未发生改变,同时,CBLB502激活TLR5后,IL-6和IL-8表达量显著升高(P<0.001)。结论携带TLR5的慢病毒感染MSC后不影响MSC生物学功能,TLR5具有功能活性且可激活下游信号通路发挥免疫调节作用。
- 肖秀孝薛冰华秦亚茹段海峰叶绍辉
- 关键词：TOLL样受体5间充质干细胞白细胞介素生物学特性
