李毅
- 作品数：27 被引量：12H指数：2
- 供职机构：武汉生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 表达兔出血症病毒VP60蛋白的重组兔粘液瘤病毒的构建与初步评价被引量：2
- 2020年
- 兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)及兔粘液瘤病毒(Myxoma virus,MYXV)分别引起兔出血症(兔瘟)和兔粘液瘤病,是两种严重危害家兔养殖业以及导致原产地欧洲野兔-穴兔(Oryctolagus cuniculus)种群近濒危的重要病原。VP60为构成RHDV衣壳的主要抗原蛋白。为研制能同时免疫预防该两种疫病的重组二联疫苗,本研究分别以MYXV和其复制非必需基因——胸腺激酶(Thymidine kinase,TK)基因为重组载体和同源重组靶基因,构建穿梭载体p7.5-VP60-GFP。将p7.5-VP60-GFP载体转染被MYXV感染的兔肾细胞株RK13,经同源重组后,在荧光显微镜下筛选出表达GFP的重组病毒,并将其命名为rMV-VP60-GFP。通过PCR和Western blotting进行重组病毒vp60基因特异性插入和表达验证结果显示,vp60和gfp基因成功插入MYXV基因组中并且可成功表达,表明成功构建了表达RHDV衣壳蛋白基因vp60的重组MYXV。动物攻毒保护试验表明,制备的重组病毒能保护家兔抵抗MYXV的致死性攻击,这为后续疫苗的研发奠定了基础。
- 王媛于倩李毅董衍明
- 关键词：VP60蛋白同源重组粘液瘤病毒兔出血症病毒
- 一种高效率提取霉菌基因组DNA的方法
- 本发明提供一种高效率提取霉菌基因组DNA的方法，属于生物工程领域。所述方法将霉菌菌体经过简易的物理研磨方法，采用溶液A进行多次洗涤，可以去除菌体粉末中的大部分疏水性蛋白和培养液中的金属离子。其有益效果体现在：1、采用分析...
- 张军林赵志扬岳硕豪赖晓晶田弛刘帅李毅
- 文献传递
- 红景天苷对犬细小病毒体外复制的抑制效应分析
- 2024年
- 旨在分析红景天苷(salidroside,SAL)对犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的抑制作用及其机制。对病毒感染过程的3个节点(吸附、侵入、复制)分别添加SAL进行孵育,检测细胞中病毒滴度,评价SAL对病毒的抑制作用;TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase dUTP Nick End Labeling)试验分析细胞凋亡;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白和炎症因子的mRNA或蛋白表达,分析和初步验证SAL抑制病毒复制的机制。结果显示,SAL可显著抑制CPV复制,但对CPV的吸附及侵入过程没有显著影响。SAL可抑制CPV诱导的细胞凋亡,且显著抑制了caspase 8及tBID的蛋白表达。进一步研究发现,CPV可诱导IL-1β及相关炎症因子上调表达,而SAL孵育病毒感染的细胞后部分炎症因子下调表达。Caspase 1、NLRP3的激活与IL-1β密切相关,病毒感染细胞后添加SAL进行孵育可抑制caspase 1的激活,而对NLRP3无显著作用。应用siRNA-caspase 8下调细胞中caspase 8的表达再孵育病毒,结果显示,细胞中IL-1β表达被抑制,与SAL的作用效果一致,表明SAL主要通过抑制caspase 8信号通路活化从而抑制炎症因子的表达。综上所述,SAL可有效抑制CPV的复制,其通过调控caspase 8信号通路抑制了CPV诱导的细胞凋亡,且抑制了部分炎症因子的表达。本研究为有效治疗CPV提供了新的途径和方法。
- 张美雯王成龙刘玉贞赵育桐朱记平李毅
- 关键词：红景天苷细胞凋亡细胞因子
- 应用CRISPR/Cas9构建稳定表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞系被引量：2
- 2019年
- 为了构建犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)结构蛋白VP2稳定表达的HEK293T细胞系,以2017年新分离的CPV-WH株为材料,扩增其VP2基因,并进行进化树分析。根据安全插入位点AAVS1位点序列设计sgRNA,并构建Cas9及sgRNA的表达载体PX335-U6-sgRNA-Cas9,同时构建含有VP2的特异性同源序列的片段HM-puro-eGFP-VP2-HA,将两者共转染HEK293T细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定表达VP2的HEK293T细胞株,并通过测序确定VP2正确插入。进化树分析显示CPV-WH的VP2存在S557N、T570K 2个氨基酸突变,该氨基酸位点可能与病毒免疫逃逸有关。通过荧光观察和免疫印迹确定了稳定表达细胞系中VP2的表达。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞,为后期制备CPV样颗粒提供细胞模型。
- 骆茹梦刘媛朱记平李毅
- 关键词：CPVVP2
- 猪ROCK1基因克隆、序列分析及时空表达研究
- 2018年
- 为进一步获得猪肉质性状候选基因Rho相关激酶1(Rho-associated,coiled-coil containing protein kinase1,ROCK1)的序列特征、生物学功能及时空表达规律等信息,本研究通过PCR、SMARTer RACE PCR的方法克隆了猪ROCK1基因,应用生物信息学方法分析该基因的蛋白质序列在不同物种中的进化关系,并采用RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法检测其在不同组织和不同猪种背最长肌不同发育阶段的表达。结果显示,ROCK1基因有2个转录本,包含4 065bp的开放阅读框(ORF),编码1 354个氨基酸;猪ROCK1基因ORF序列与人、小鼠和大鼠的ORF序列的同源性分别为95%、91%和91%,相应的氨基酸序列同源性分别为98%、96%和94%,该蛋白在不同物种间高度保守;ROCK1基因的组织分布较广泛,不同发育阶段在同一组织中的表达会发生变化;胚胎期ROCK1基因在梅山猪背最长肌中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),出生后ROCK1基因在2个猪种背最长肌中的表达无显著差异(P>0.05)。本试验结果为研究ROCK1基因在猪骨骼肌发育中的生物学功能及其分子机制奠定基础。
- 冯小婷朱记平张蕊蕊李毅
- 关键词：克隆
- 一种利用ANP或IgANP基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种利用ANP或IgANP基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用。本发明以ANP为目的基因构建重组腺病毒载体，该载体在舌癌细胞SCC9内表达ANP多肽，同时在ANP序列前添加一个免疫球蛋白的信号肽序列，构...
- 张军林岳硕豪赵志扬谢立兰赖晓晶程烨李毅
- 姜黄素在制备防治猪传染性胃肠炎病毒药物中的应用
- 本发明公开了姜黄素在制备防治猪传染性胃肠炎病毒药物中的应用。首先确定了姜黄素对PK‑15细胞的安全浓度范围，并以此为依据在PK‑15细胞中通过TCID<Sub>50</Sub>实验和Real‑time RT‑PCR等多种...
- 谢立兰甘喆张军林赖晓晶方华为李毅
- 文献传递
- 人细小病毒B19分子生物学研究进展被引量：6
- 2020年
- 人细小病毒B19(Human parvovirus B19,简称B19病毒),是目前为止已知能够感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒作为一种重要病原,能够引起如儿童传染性红斑、急性再障危象、胎儿水肿甚至死胎等疾病。文中从B19病毒基因型、病毒受体、基因组结构特点与复制、病毒转录与转录后调控、病毒非结构和结构蛋白特点与功能以及病毒诊断及抗病毒药物研究策略6个方面来综述B19病毒的最新研究进展,以期为B19病毒致病机制的深入研究与治疗诊断策略的制定提供参考。
- 董衍明李京京徐鹏李毅马立新王媛
- 关键词：B19病毒
- 人博卡病毒1型感染性克隆的构建方法及其应用
- 本发明公开了一种人博卡病毒1型感染性克隆的构建方法及其应用，属于分子生物学及基因工程领域。将人博卡病毒的ITR区序列分为5个片段，分段连接到去除B19基因、添加多克隆位点的pB19‑4244d载体上，得到人博卡病毒1型感...
- 李毅朱记平
- 文献传递
- 一种利用ANP或IgANP基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种利用ANP或IgANP基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用。本发明以ANP为目的基因构建重组腺病毒载体，该载体在舌癌细胞SCC9内表达ANP多肽，同时在ANP序列前添加一个免疫球蛋白的信号肽序列，构...
- 张军林岳硕豪赵志扬谢立兰赖晓晶程烨李毅
- 文献传递
