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李学会
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合作作者
孙晓萌
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钙池操纵的钙通道在乙醇诱导HepG2细胞钙超载中的作用
2013年
目的研究乙醇诱导肝细胞钙超载的机制及钙池操纵的钙离子通道(SOes)在其中的作用。方法使用浓度梯度的乙醇处理HepG2细胞,并观察细胞外钙离子螯合剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)及SOCs抑制剂2-APB对200umol/L乙醇刺激的干预效应。实验分为:(1)正常对照组:磷酸盐缓冲液刺激;(2)乙醇慢性刺激组:分别给予25、50、100、200、400、800μmol/L乙醇,刺激24h或200μmol/L乙醇,刺激24、48、72h;(3)EGTA处理组:200μmol/L乙醇+0.5μmol/LEGTA,刺激24h;(4)2-APB处理组:200μmol/L乙醇+50μmol/L2-APB,刺激24h。细胞计数CCK8试剂盒检测细胞存活率;全自动生物化学分析仪检测HepG32细胞培养上清液ALT、AST漏出量;流式细胞仪检测HepG2细胞胞浆Ca2+浓度。荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SOCs通道蛋白分子间质相互作用因子1及钙释放激活钙通道蛋白1的基因及蛋白表达。各组间均数的比较采用单因素方差分析或独立样本t检验。结果50、100、200、400、800μmol/L乙醇刺激24h使HepG2细胞的存活率分别降低为97.3%±2.9%、83.4%±3.3%、67.8%±4.4%、37.5%±3.o%、14.1%±4.9%,组间比较,F=99.945,P〈0.01,细胞存活率呈浓度依浓度依赖性;细胞培养基上清液ALT漏出量分别增加为(14.2±2.8)、(17.7±3.2)、(20.0±2.6)、(21.6±1.3)、(24.9±1.7)U/L,组间比较,F=15.286,P〈0.01;AST漏出量分别增加为(72.0±4.7)、(91.6±7.4)、(107.3±11.4)、(116.5±13.4)、(128.9±7.1)u/L,组间比较,F=39.674,P〈0.01;使HepG2细胞的[Ca2+]i水平分别增高为正常对照组的(1.3±0.4)、(1.3±0.2)、(1.4±0.2)、(2.3±0.3)、(2.6±0.2)倍,F=56.978,P〈0.01。EGTA、2-APB干预使200μmol/L乙醇刺激
刘慧敏
阎立惠
罗争
孙晓萌
崔瑞冰
李学会
阎明
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酒精性
HEPG2细胞
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