刘琛
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
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- 筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
- 2014年
- 目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。
- 李小勤唐宜桂刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：GST诱饵蛋白
- 乳源免疫调节肽对酒精诱导性肝细胞损伤的干预机制
- 2015年
- 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对肝细胞酒精性脂肪变性的干预机制。方法 MTT法筛选正常肝细胞株(LO2)酒精诱导的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围,在肝细胞内加入酒精和不同浓度的PGPIPN进行干预,连续造模3个月,建立能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,观察PGPIPN对肝细胞脂肪变性的防治效果。油红O染色法观察LO2细胞脂肪变性程度,RT-PCR法检测脂肪合成相关基因(ACC、PPAR-γ)的表达。结果成功建立了能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,并筛选出酒精诱导LO2脂肪变性的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围。PGPIPN可以防治和缓解脂肪变性,PGPIPN可能通过降低ACC的基因表达,升高PPAR-γ的基因表达来实现。结论 PGPIPN可防治和放缓肝细胞酒精性脂肪病变,机制可能是减少脂肪合成。
- 刘琛雷婷周娟赵梦静秦宜德
- 关键词：脂肪变性脂肪合成
- 乳源抗菌-免疫调节融合肽对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
- 2014年
- 目的研究乳源抗菌-免疫调节融合肽(AIFP)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法测定AIFP对卵巢癌细胞株SKOV3细胞和原代培养的卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术测定AIFP对SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞凋亡、周期的影响;并用RT-PCR检测AIFP对SKOV3细胞及原代癌细胞凋亡和周期相关基因表达水平的影响,以探讨其可能机制。结果 MTT法显示,AIFP对卵巢癌细胞的增殖具有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,AIFP诱导卵巢癌细胞的凋亡,具有剂量和时间依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR结果表明,AIFP可以影响细胞凋亡和细胞周期相关基因(Akt、CDC25C和cyclinB1)的表达。结论 AIFP上调卵巢癌细胞凋亡和周期相关基因Akt、CDC25C和cyclinB1的表达,对卵巢癌细胞株SKOV3具有抑制增殖和促进凋亡的作用。
- 唐宜桂李小勤刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：SKOV3增殖凋亡
- RNA干扰ERCC1基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响被引量：4
- 2015年
- 目的探讨RNA干扰核苷酸剪切修复偶联因子1(ERCC1)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法实验分为空白对照组、特异性转染组和非特异性转染组。采用MTT法测定PGPIPN、DDP对3组细胞的增殖抑制率,RT-PCR法检测PGPIPN对3组细胞乳腺癌易感基因1(BRCA1)基因表达的影响。结果 MTT法结果显示,PGPIPN作用人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 48 h,对其增殖有一定的抑制作用,在浓度为40、60 mg/L时,与浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05);DDP、PGPIPN分别作用特异性转染组细胞48 h,其增殖明显受到抑制,与0 mg/L比较,差异均有统计学意义(P<0.05);RTPCR法结果显示,PGPIPN作用特异性转染组细胞48 h,其BRCA1基因表达随着PGPIPN浓度升高而明显降低,在浓度为40、60 mg/L时,与PGPIPN浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PGPIPN对SKOV3/DDP细胞的增殖有一定的抑制作用,并且通过干扰ERCC1基因表达可以明显增强SKOV3/DDP细胞对DDP、PGPIPN的敏感性,同时可增强PGPIPN对BRCA1基因的下调水平。
- 雷婷秦宜德刘琛周娟赵梦静
- 关键词：RNA干扰ERCC1卵巢癌DDP
- 乳源免疫调节肽对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用。方法 60只昆明种雄性小鼠,随机均分为对照组、模型组、护肝片(0.3 g/kg)组、PGPIPNⅠ组、Ⅱ组和Ⅲ组。采用梯度乙醇溶液灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝(AFL)模型,造模的同时给予药物干预,共12周。实验结束后,处死小鼠,收集血清和肝脏。测定小鼠肝指数(LI)、脾指数(SI)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)及高密度脂蛋白(HDL-C)和肝组织中甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,并观察肝脏病理组织学变化。结果 PGPIPN各剂量组均能显著降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性,减少血清中TG、TC及LDL-C和肝组织中TG、MDA含量,升高HDL-C、SOD含量和GSH-PX活性水平;同时,病理组织学检查结果显示,PGPIPN各剂量组小鼠肝脏中小泡性脂肪变性程度明显减轻。结论PGPIPN对酒精性脂肪肝小鼠有防治作用,其机制可能与其调节脂质代谢,抗脂质过氧化有关。
- 杨浩然魏彩唐宜桂李小勤刘琛顾芳秦宜德
- 关键词：酒精性脂肪肝脂质过氧化肝脏脂肪变性
- 乳源免疫调节肽提高DDP对卵巢癌细胞的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察体外实验中乳源免疫调节肽(PGPIPN)与抗癌药物顺铂(DDP)联合用药对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。方法 MTS检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTS实验表明PGPIPN联合DDP处理组对卵巢癌细胞抑制率显著高于单独用DDP组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量和时间依赖性。流式细胞术显示PGPIPN可以协同DDP促进人原代卵巢癌细胞的凋亡,并使得肿瘤细胞停滞于G0/G1期。细胞划痕实验显示联合用药明显抑制细胞的运动能力,与单独用药差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PGPIPN可以提高DDP对原代卵巢癌细胞的作用。
- 周娟刘琛顾芳赵梦静杨雪王晶秦宜德
- 关键词：联合用药免疫调节肽顺铂
