万玉华
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：三峡大学化学与生命科学学院生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化被引量：4
- 2008年
- 研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法,采用正交试验设计法对影响SRAP-PCR反应的引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量、Mg2+和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化,同时对DNA模板浓度进行了筛选。结果表明,Mg2+、dNTPs、Taq酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响。建立了巴东木莲20μL SRAP-PCR的反应体系为1×buffer、Mg2+浓度为2.0 mmol·L-1、dNTPs浓度为0.25 mmol·L-1、引物浓度为0.45μmol·L-1、Taq酶为0.5 U和模板DNA 40ng。适宜的扩增程序为94℃预变性1 min,94℃变性1 min,33℃复性1 min,72℃延伸1 min,10个循环;94℃变性1 min,55℃复性1 min,72℃延伸1 min,30个循环;最后72℃延伸5min。试验表明,该体系重复性好、稳定性强。
- 万玉华余璐璐李晓玲陈发菊梁宏伟何正权
- 关键词：巴东木莲DNA提取SRAP-PCR反应体系正交设计
