杨利
- 作品数：21 被引量：16H指数：2
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- 猪初乳中PEDV IgA抗体捕获ELISA检测方法的建立及其初步应用
- 2023年
- 为建立评价猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗免疫效力的方法,本研究利用纯化的PEDV免疫BALB/c小鼠,按照常规方法制备PEDV全病毒单克隆抗体(MAb)作为捕获抗体,PEDV细胞培养上清为夹心抗原,HRP标记的羊抗猪IgA为二抗,采用棋盘滴定法对各反应条件优化后建立了用于猪初乳中PEDV IgA检测的捕获ELISA方法,并确定其临界值为0.25。采用该捕获ELISA对PEDV、PCV2b、PRRSV、PRV、JEV、PPV、FMDV与CSFV IgA抗体阳性猪初乳进行检测,结果显示,除PEDV IgA抗体阳性猪初乳检测结果为阳性外,其他病毒抗体阳性猪初乳检测结果均为阴性,表明该方法特异性强。采用该方法和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对从1∶10开始2倍倍比稀释的16个稀释度的阳性猪初乳样品检测,结果显示该方法对阳性样品检测的最大稀释度为1∶40960,是BIONOTE PEDV IgA试剂盒敏感性的16倍(1∶2560),表明本研究建立方法的敏感性高。分别采用同一批次和不同批次制备的MAb包被的ELISA板分别检测5份PEDV IgA抗体阳性和1份PEDV IgA抗体阴性猪初乳,评估该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数分别为0.34%~4.49%和1.90%~8.71%,均小于10%,重复性好。利用该捕获ELSIA和IDEXX PEDV IgA抗体试剂盒分别对50份猪初乳检测,结果显示两种方法对样品检测的OD450nm值趋势高度一致,表明该方法检测结果与IDEXX试剂盒相关性强。利用该捕获ELISA和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对100份临床采集的猪初乳样品检测,结果显示二者总体符合率为97.0%。利用该方法对90份免疫背景不同的猪初乳检测,结果显示,未感染PEDV且未免疫PED疫苗的母猪初乳检测结果均为阴性结果,感染了PEDV或接种过PED疫苗的母猪初乳均为阳性结果,检测结果与样品的免疫背景相符。本研究建立的捕获ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,与同类进口产品检测结果符合率高,对临床样品的检测结果与其�
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- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 一种兽用疫苗佐剂、制备方法及其应用
- 本发明提供一种兽用疫苗佐剂、制备方法及其应用，兽用疫苗领域。所述兽用疫苗佐剂，包括分别负载有重组CTA1‑DD蛋白和PGN多肽的羧甲基壳聚糖‑硫酸葡聚糖纳米颗粒，所述重组CTA1‑DD蛋白的序列如SEQ ID NO:3所...
- 张元鹏秦竹郑其升陈瑾杜露平于晓明王义伟李兰侯立婷程海卫乔绪稳杨利张浩明侯继波
- 猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立被引量：2
- 2022年
- 采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8000。通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90%~3.21%、1.89%~6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场猪瘟疫苗免疫猪血清进行检测,抗体阳性率为80.8%(189/234),证明了该疫苗免疫效果良好。此外,该方法为一步法,与现有方法相比,检测过程缩短至40 min。试验结果表明,利用酵母表达E2蛋白并制备中和抗体,建立了一种更加高效检测猪瘟中和抗体的阻断ELISA方法。
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- 关键词：CSFV阻断ELISA
- 猪流行性腹泻病毒高效亚单位疫苗
- 本发明提供猪流行性腹泻病毒高效亚单位疫苗，涉及生物疫苗制造领域。该亚单位疫苗，采用如下方法制备（1）将聚赖氨酸水溶液与鞭毛蛋白水溶液混合，搅拌5‑10h，冻干后得到免疫增强剂纳米颗粒冻干粉；所述鞭毛蛋白的氨基酸序列如SE...
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- 基于DC细胞的双功能纳米抗体及其构建方法和应用
- 本发明公开基于DC细胞的双功能纳米抗体及其构建方法和应用，所述双功能纳米抗体是以接头元件将基于DC细胞的目的蛋白特异性纳米抗体和编码粒径为150nm以下的病毒抗原特异性纳米抗体的基因连接后获得目的基因片段并重组表达获得的...
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- 刀豆蛋白A纯化猪流行性腹泻病毒的研究
- 2023年
- 为开发一种新型高效、低成本的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗原纯化方法,本研究尝试了一种基于凝集素(刀豆蛋白A,Con A)的PEDV浓缩纯化方法。通过Con A与PEDV病毒粒子的特异性结合,形成Con A-PEDV复合物,然后通过低速离心和竞争性解离即可实现病毒纯化。结果表明:1)当Con A的使用浓度为80μg/mL,室温作用2 h,4000 r/min离心15 min时,纯化效果较佳;2)利用Tris-HCl缓冲液(pH 7,0.01 mol/L,内含200 mmol/L甲基-α-D-吡喃甘露糖苷和50 mmol/L NaCl)进行解离时,较PBS缓冲液有更高的解离效率;3)该方法病毒回收率大约为80%,总蛋白去除率可达90%。综上,本研究利用Con A纯化PEDV是可行的,为高质量PEDV灭活疫苗的研发奠定基础。
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- 关键词：刀豆蛋白A猪流行性腹泻病毒纯化
- 猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒
- 本发明提供猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，属于生物技术检测领域。分泌抗猪圆环病毒2型单克隆抗体的杂交瘤细胞株1G9，保藏号为：CCTCC NO:C2016105。猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，包括:检测抗体和包被有...
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- 文献传递
- 一种检测猪初乳中抗PEDV特异性IgA抗体的夹心ELISA试剂盒
- 本发明提供一种检测猪初乳中抗PEDV特异性IgA抗体的夹心ELISA试剂盒，涉及生物检测试剂领域。分泌抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株10A4，保藏号为：CCTCC NO:C201779。本发明还提供所述杂交瘤...
- 张浩明杨利于晓明陈瑾郑其升侯继波
- 基于双特异纳米抗体FMDV血凝检测方法的建立
- 2024年
- 本研究利用基因工程方法将抗口蹄疫病毒(FMDV)纳米抗体Nb205和抗鸡醛化红细胞(cRBC)纳米抗体NbRBC48的基因片段连接,构建双特异纳米抗体Nb205-48,其相对分子质量为3.5×10^(4),能同时与FMDV和cRBC反应。利用Nb205-48成功建立了可用于FMDV抗原检测的血凝方法,该方法检测灵敏度为1μg/ml,与其他病毒无交叉反应,且批内和批间重复性好。分别采用血凝法和夹心ELISA方法对3批次FMDV抗原进行了检测,二者检测结果基本吻合。本研究建立了基于双特异纳米抗体Nb205-48的血凝检测方法,该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,且简便、快捷、成本低,其检测结果与传统的FMDV定量检测方法的检测结果相关性好,为检测口蹄疫疫苗生产过程中FMDV抗原的含量提供了新方法。
- 杨利张浩明张浩明陈瑾乔绪稳程海卫
- 关键词：口蹄疫病毒
- 一种介导FMDV血凝的蛋白、编码基因及其应用
- 本发明提供一种介导FMDV血凝的蛋白、编码基因及其应用，属于生物技术领域。所述介导FMDV血凝的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供所述蛋白的编码基因，携带该蛋白的编码基因的载体、重组菌，以及所述...
- 杨利程海卫张浩明郑其升陈瑾乔绪稳侯立婷杜露平秦竹李兰于晓明张元鹏王义伟
