李秀娟
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- P2X_7受体阻断剂对三磷腺苷诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平的影响
- 2017年
- 目的观察三磷腺苷(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平变化的特点,并探讨P2X_7受体阻断剂对其的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞接种于含体积分数10%胎牛血清高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为4组,分别加入含0、1、3、5 mmol·L^(-1)ATP的培养液,每孔100μL,各组均分别作用15、30、60 min,然后用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluo-3/AM染细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度。另取对数生长期的SH-SY5Y细胞悬液接种于含体积分数10%胎牛血清高糖DMEM的96孔板中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为正常对照组、ATP组及KN-62低、中、高剂量组,正常对照组细胞在每孔100μL培养液中常规培养,ATP组细胞在每孔100μL含5 mmol·L^(-1)ATP的培养液中培养,KN-62低、中、高剂量组细胞分别每孔先用100μL含100、500、1 000 nmol·L^(-1)KN-62的培养液孵育30 min,每孔再用100μL的5 mmol·L^(-1)ATP培养液处理1 h,用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluro-3/AM染色细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染色细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度变化,图像分析软件记录结果,测每组细胞中Ca^(2+)的平均荧光强度。每次实验每组设3个平行复孔,实验重复3次。结果0 mmol·L^(-1)ATP组呈现荧光的细胞数量少,荧光强度弱;1、3、5 mmol·L^(-1)ATP组随着ATP剂量增加,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强;若ATP剂量相同,则随着ATP作用时间的延长,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强。正常对照组、ATP组、KN-62低、中、高剂量组细胞荧光强度分别为468.24±45.67、3 292.35±159.64、3 013.27±321.42、2 515.77±320.98、2 486.32±318.31,ATP组细胞平均荧光强度显著强于正常对照组(P<0.05);KN-62低、中、高剂量组细胞平均荧光强度均低于ATP
- 李秀娟王国红张利彬杨坤丽李超堃王璐宋景贵赵红岗李东亮
- 关键词：三磷腺苷人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞P2X7受体
- 孕酮减轻ATP诱导的SH-SY5Y细胞损伤
- 2017年
- 目的:探讨孕酮对抗腺苷三磷酸(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用和机制。方法:取对数生长期的SH-SY5Y细胞按照孕酮或ATP浓度的不同进行分组,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Fluo-3染色检测细胞内Ca^(2+)浓度的变化,Western blot法检测嘌呤能P2X_7受体表达的变化。结果:与对照组相比,不同浓度(1、3、5和7 mmol/L)ATP作用2 h,SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度明显增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。浓度为3、10和30 nmol/L的孕酮预孵育30 min可减轻ATP损伤作用,细胞存活率较单纯ATP组明显升高(P<0.05或P<0.01)。孕酮(30nmol/L)或P2X_7受体拮抗剂KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min均可显著抑制ATP诱导的胞内YO-PRO-1的荧光增强(P<0.01),而孕酮和KN-62两者之间没有明显差异。正常组细胞内钙离子含量少,ATP组细胞内钙离子荧光强度较对照组明显增高(P<0.05),孕酮(30 nmol/L)或KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min可明显降低(P<0.05)ATP诱导的胞内钙荧光增强,而孕酮和KN-62两者之间的作用无明显差异。ATP组SH-SY5Y细胞P2X_7受体表达较对照组明显增加(P<0.05),而孕酮(30 nmol/L)预孵育30 min则可显著降低ATP诱导的P2X_7受体表达(P<0.05)。结论:孕酮可抑制ATP诱导的P2X_7受体表达、膜孔形成和胞内Ca^(2+)升高,降低细胞死亡率,明显减轻高浓度ATP对SH-SY5Y细胞的损伤作用。
- 李秀娟沈慧魏林郁王国红张利彬李超堃李新娟王璐赵红岗宋景贵李东亮
- 关键词：孕酮腺苷三磷酸SH-SY5Y细胞
- MAPK信号通路在外源性H2S预处理对ATP诱导的小胶质细胞活化中的作用
- 目的观察外源性H2S预处理对ATP诱导的大鼠小胶质细胞活化的影响,探讨MAPK信号通路在H2S抗神经元损伤中的作用机制。方法培养的大鼠Microglial按照ATP的浓度和作用时间进行分组。MTT法检测细胞存活率,蛋白质...
- 王娇娇李璐李秀娟王琪李东亮
- 文献传递
- 亮蓝G减轻急性CO中毒大鼠海马的损伤被引量：1
- 2018年
- 目的:观察亮蓝G(BBG)对急性一氧化碳中毒(ACMP)引起的大鼠海马组织损伤的影响,探讨配体门控离子通道嘌呤能P2X_7受体(P2X_7R)在一氧化碳中毒脑损伤中的作用。方法:80只8～10周龄SD大鼠分为对照(control)组、ACMP组、ACMP+BBG组和BBG组。采用腹腔注射CO(100 m L/kg)的方法制备大鼠ACMP模型。检测静脉血中的碳氧血红蛋白(Hb CO)浓度来判断CO中毒程度。RT-qPCR检测大鼠海马组织P2X_7R的mRNA表达。干湿称重法检测海马组织水肿程度。ELISA法检测海马组织促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6的含量。Morris水迷宫实验评价学习记忆能力。HE染色观察海马CA1区细胞形态学改变。结果:与control组(100%)相比,染毒6 h后ACMP组大鼠的存活率降低至55%;海马组织P2X_7R的mRNA表达及促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6的含量均明显增加(P <0. 05);含水量升高到80. 72%±0. 93%;大鼠逃避潜伏期明显延长,在目标象限探索时间明显缩短。值得注意的是,BBG预处理可以明显改善ACMP诱导的这些海马损伤。另外,大鼠染毒后3 d,海马CA1区的神经元排列紊乱稀疏,细胞形态不完整,细胞核深染、固缩。而BBG预处理能够显著改善CA1区的细胞形态。结论:P2X_7R与ACMP诱导的海马损伤相关。BBG能够增加ACMP大鼠的存活率,减少促炎因子的释放,减轻海马水肿,改善学习记忆能力,减轻ACMP引起的CA1区神经元损伤。
- 杨坤丽沈慧李璐张利彬李秀娟魏林郁黄亚迪赵红岗江林华李东亮
- 关键词：急性一氧化碳中毒海马促炎因子
- 孕酮干预ATP诱导SH-SY5Y细胞损伤的膜孔机制
- 目前认为三磷酸腺苷(Adenosine-5'-triphosphate，ATP)是神经系统中重要的信号分子之一，P2X7受体(P2X7R)是介导ATP毒性作用的主要受体，生理浓度（微摩尔水平）下，ATP激活P2X7R形成...
- 李秀娟
- 关键词：孕酮三磷酸腺苷神经细胞损伤
