彭俊平
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 樱桃谷鸭CD3ε胞外区多肽原核表达、抗体制备及初步应用被引量：1
- 2010年
- 应用PCR技术从樱桃谷鸭总RNA中克隆CD3ε基因ORF序列（DuCD3ε）,通过生物学软件分析,切除信号肽和跨膜区,将胞外区cDNA（DuCD3ε）插入表达载体pET-28a,构建了E.coliBL21（pET-28a/DuCD3ε）原核表达系。经IPTG诱导表达、蛋白纯化,制备兔抗DuCD3ε多克隆抗体。应用免疫组织化学SABC方法在樱桃谷鸭外周血液涂片上进行初步应用。结果显示,DuCD3ε胞外区序列长252 bp,编码83个氨基酸。SDS-PAGE和Western-blot分析证实重组DuCD3ε（rDuCD3ε）在BL21大肠杆菌中表达,表达蛋白相对分子质量约为14 000,经3次免疫后,通过间接ELISA测定兔抗rDuCD3ε蛋白多克隆抗体效价为1：12 800。在鸭瘟病毒感染后不同时间,对照组CD3＋T淋巴细胞数占淋巴细胞总数的百分比为28%~47%,试验组CD3＋T淋巴细胞百分比为32%~77%,在感染后1~3 d外周血液中CD3＋T淋巴细胞比值急剧升高,3 d以后比值缓慢下降。结果表明,本试验成功表达CD3ε胞外区多肽,制备的兔抗樱桃谷鸭CD3ε多克隆抗体可用于鸭外周血中CD3＋T淋巴细胞标记染色,具有较好的特异性。
- 李卫白家媛彭俊平谷长勤张万坡程国富陈敏胡薛英
- 关键词：樱桃谷鸭多克隆抗体
- 鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立被引量：1
- 2011年
- 应用分子生物学技术原核表达ChIL-6,以ChIL-6重组蛋白为免疫原,按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心ELISA方法后,为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示,经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达,为了建立检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法,本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg/L,4℃过夜;酶标二抗稀释度为1∶400,37℃1h;应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6,其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明,本试验建立的检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。
- 李卫彭俊平谷长勤胡薛英张万坡程国富
- 关键词：鸡白细胞介素-6原核表达
- 鸡白细胞介素-1和白细胞介素-6双抗夹心ELISA检测方法的建立
- 细胞因子是由活化的免疫细胞和相关细胞(成纤维细胞和内皮细胞等)产生的具有调节细胞功能的生物活性物质。鸡的白细胞介素-1和白细胞介素-6是由单核-巨噬细胞、T淋巴细胞所分泌的某些非特异性发挥免疫调节以及在炎症反应中起作用的...
- 彭俊平
- 关键词：鸡疾病白细胞介素-1白细胞介素-6免疫程序
- 文献传递
