杨岚
- 作品数：1 被引量：11H指数：1
- 供职机构：南京医科大学附属无锡人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低表达LATS1通过抑制Hippo信号通路促进间充质干细胞的分化增殖和迁移被引量：11
- 2017年
- 目的 探讨低表达大肿瘤抑制因子1（LATS1）基因抑制Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）分化、增殖和迁移能力的影响.方法 将C57BL/6小鼠mMSCs分为正常对照组（MSC组）、空载体对照组（MSC-GFP组）、过表达LATS1实验组（MSC-LATS1组）、空干扰病毒转染组（MSC-shControl组）、转染干扰LATS1病毒组（MSC-shLATS1组）,分别构建过表达或低表达LATS1的慢病毒载体及其空载体对照并转染mMSCs.用荧光显微镜和流式细胞仪评估慢病毒转染效率;用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LATS1 mRNA表达,用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测LATS1、磷酸化YAP（p-YAP）、14-3-3蛋白表达,以明确LATS1对Hippo信号通路的调控作用;用茜素红、油红O染色及qRT-PCR检测成骨转录因子Runx2、OSX及成脂转录因子C/EBPα、PPAR-γ的mRNA表达,以明确Hippo信号通路对mMSCs成骨及成脂分化的影响;用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测mMSCs的数量,以评估Hippo信号通路对mMSCs增殖能力的影响;用划痕实验及Transwell小室迁移实验评估Hippo信号通路对mMSCs水平及垂直迁移能力的影响.结果 慢病毒载体转染mMSCs效率可达94.74%-96.10%.与MSC-GFP组比较,MSC-LATS1可激活Hippo信号通路〔LATS1 mRNA（2-ΔΔCT）：4.37±0.21比1.20±0.04,LATS1蛋白（灰度值）：2.21±0.06比1.09±0.10,p-YAP/YAP蛋白比值（灰度值）：1.51±0.13比0.98±0.05,14-3-3蛋白（灰度值）：1.92±0.18比1.10±0.09,均P〈0.05〕,抑制mMSCs成骨及成脂分化〔钙质沉积（A值）：0.13±0.02比0.40±0.03,Runx2 mRNA（2-ΔΔCT）：0.51±0.02比0.98±0.09,OSX mRNA（2-ΔΔCT）：0.41±0.04比1.04±0.09,脂质沉积（A值）：0.10±0.02比0.25±0.03,C/EBPαmRNA（2-ΔΔCT）：0.33±0.03比1.11±0.09,PPAR-γmRNA（2-ΔΔCT）：0.29±0.02比1.04±0.10,均P〈0.05〕,抑制4-7 d的MSC增殖及mMSCs水平和垂直迁移能力〔划痕弥合程度：（18.65±3.53）%比（40.29±1.87�
- 李朗董亮惠姣洁高飞王秋卉杨岚张江茜严洁
- 关键词：间充质干细胞分化增殖迁移
