陈虹 作品数:74 被引量:305 H指数:8 供职机构: 中国医学科学院基础医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
类固醇激素受体RNA激活因子研究进展 2006年 傅成波 陈虹 黄秉仁关键词:类固醇激素受体 配体结合域 靶基因表达 细胞转录因子 DNA序列 IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响 被引量:2 2014年 目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。 杨霞 张俊文 黄秉仁 陈虹关键词:TRAF6 NF-ΚB ISRE 相互作用 HRSP12慢病毒表达载体的构建及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及增殖的影响 2014年 目的构建热反应蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装慢病毒颗粒并感染宫颈癌细胞HeLa,分析过表达的HRSP12对HeLa细胞凋亡和增殖的影响。方法用反转录PCR扩增HRSP12全长编码顺序,构建慢病毒表达载体,利用人胚肾细胞HEK293T包装重组的慢病毒颗粒,感染HeLa细胞,用蛋白免疫印迹法检测剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)并用MTS比色法检测HeLa细胞增殖的情况。结果编码全长HRSP12的cDNA片段为414bp,克隆至pWPI-linker载体成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装的慢病毒颗粒能够高效感染HeLa细胞,在细胞内表达Flag-HRSP12融合蛋白。HRSP12的过表达能够引起HeLa细胞caspase-3的剪切体增多,能够抑制HeLa细胞的增殖。结论成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,初步结果表明,HRSP12可能具有诱导HeLa细胞凋亡、抑制细胞增殖的活性,为进一步研究HRSP12的生物学功能奠定了基础。 谭宽 张璇 马晓骊 黄秉仁 陈虹 陈等关键词:慢病毒载体 细胞凋亡 人SRY基因表达及表达蛋白的结合功能研究 被引量:18 1998年 目的研究人类性别决定基因(sexdeterminingregionontheYchromosome,SRY)表达蛋白对下游基因的调节作用。方法将SRY基因HMG结构域片段与表达载体PET-15b-进行重组,构建了SRY基因的表达质粒PETSY,转入大肠杆菌中表达,组氨酸结合树脂柱纯化表达蛋白,与苗勒氏管抑制因子基因(Mülerianinhibitingsubstance,MIS)启动子区片段进行凝胶电泳阻滞试验及竞争试验。结果获得SRY基因表达蛋白,分子量接近20.8U(21kD),凝胶电泳阻滞试验及竞争试验表明,SRY表达蛋白能特异结合位于19号染色体的MIS基因的启动子区。结论提示SRY基因对MIS基因转录具有调节作用。 杜晓娟 伏瑾 蔡玲玲 陈虹 黄秉仁关键词:性别决定基因 基因表达 MIS 46,XX真两性畸形的基因诊断 被引量:1 1994年 睾丸决定因子(Testis-determiningfactor,TDF)位于Y染色体短臂上,它的表达产物诱导睾丸组织的发生。SRY基因(Sex-determiningregionoftheY)位于Y染色体的性别决定区内,许多特征显示SRY可能就是TDF。采用多聚酶链反应(PCR)结合斑点杂交对3例46,XX真两性畸形性腺组织的石蜡切片中SRY基因进行检测,2例检测到SRY基因,1例未检测到。性腺组织病理检查均为卵睾组织。为探讨两性畸形的发病机理提供了资料。 杜晓娟 熊健 陈虹关键词:两性畸形 聚合酶链反应 斑点杂交 一种改进的重复多色荧光原位杂交技术 被引量:1 2005年 多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法———重复多色荧光原位杂交技术(repetitive multicolour fluorescence in situ hybridization,RM-FISH)。采用特异的全染色体涂染探针,分别用Cy3、Cy5、FITC3种荧光素直接标记,组合制备4组六色的探针池,对同一染色体片先后进行4次杂交,通过装备了4组滤镜的荧光显微镜捕获信号。RM-FISH技术结合反相DAPI显带对1例原发性食管鳞癌进行核型分析,获得了全部染色体的特异信号。本研究建立的RM-FISH简便、易行,是光谱核型分析的一种较理想的替代技术。 杨壹羚 徐昕 陈虹 李锋 韩亚玲 罗曼莉 吴玉鹏 蔡岩 张钰 詹启敏 吴旻 王明荣关键词:荧光原位杂交 核型 染色体 脆性X综合征基因诊断与优生 被引量:1 1998年 脆性X综合征是一种严重影响人类智力发育的遗传性疾病,通过对脆性X基因FMR—1的DNA分析,建立了脆性X基因诊断的方法,可用于智力低下患者及群体的筛查,检出脆性X患者、携带者,开展产前诊断,这对预防X连锁智力低下,提高人口素质有重要意义。 丁秀原 陈虹关键词:脆性X综合征 基因诊断 产前诊断 优生 在毕赤酵母中表达的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF_(121))为氨基端4个氨基酸缺失的异构体 被引量:1 2004年 为获得重组人血管内皮生长因子 ,采用重叠PCR扩增出含Kozak顺序、α因子前导肽和hVEGF12 1的融合基因 ,经DNA测序无误后 ,插入Pichiapastoris酵母载体 ,并体外构建 4拷贝表达单元质粒pAO81 5 4KαVEGF12 1。表达载体转化酵母宿主菌GS1 1 5 ,筛选出高效表达hVEGF的转化子。摇瓶培养并 1 %甲醇诱导 80h的VEGF分泌性表达量可达 30mg L。表达产物经S Sepharose离子交换层析纯化后测活表明表达产物二聚体具有良好生物活性。SDS PAGE分析、Western印迹表明表达产物具有适宜的分子量和抗原性。VEGF蛋白经氨基端氨基酸测序证实纯化后的不同糖化程度产物为同一蛋白质 ,但均为氨基端缺失了 4个氨基酸的全长为 1 1 7个氨基酸的VEGF。 陈工 马晓骊 陈虹 王欣 黄秉仁关键词:毕赤酵母 氨基酸 IgE高亲和力受体β链基因的多态性与中国人哮喘易感性的研究 被引量:11 2000年 目的 探讨IgE高亲和力受体 β链基因 (FcεRI β)的多态性与中国人哮喘易感性的连锁关系。方法 用PCR/RFLP检测FcεRI β基因编码区E2 37G变异位点及非编码区的 2个多态性位点 ,对 32个哮喘家系共 192份样品以及 12 2例哮喘患儿进行分析。结果 (1)中国人在这 3个位点的等位基因频率与白种人及日本人明显不同。 (2 )哮喘家系样本显示 ,第 2内含子区多态位点的A等位片段与哮喘有显著相关性 (P <0 .0 5 ,OR =2 .0 39,95 %CI=1.15 0 - 3.6 16 ,P =0 .0 15 ) ;基因型影响血清总IgE水平的变化 (F =3.5 8,P =0 .0 2 9) ;A等位片段与高血清总IgE的相关性有显著性意义 (P <0 0 5 ,RR =1.36 1,95 %CI=1.0 2 8- 1.80 3,P =0 .0 38)。 (3)编码区E2 37G位点及另一个非编码区位点未获得有显著意义的结果。结论 本研究的两组样本中 ,未能获得足够证据证实FcεRI 陈虹 陈育智 胡良平 伏瑾 张惠琴 马煜关键词:哮喘 易感性 基因多态性 重组EpoAB-NGF模拟肽的神经营养功能 被引量:1 2011年 目的:研究重组融合蛋白红细胞生成素AB肽-神经生长因子模拟肽(EpoAB-NGF9和EpoAB-NGF/12)的神经营养作用。方法:构建pET-42a-EpoAB-NGF9/12原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,显微镜观察PC12细胞诱导分化,流式细胞仪检测凋亡细胞。结果:大肠杆菌表达的重组融合蛋白GST-EpoAB-NGF9/12分子量约为30kDa,抗GST抗体免疫印迹反应呈阳性。融合蛋白可以诱导PC12细胞分化,促进轴突生长。R2L1细胞去血清培养,凋亡细胞占(31.7±0.60)%,去血清后加入融合蛋白GST-EpoAB-NGF9/12,细胞凋亡率分别为(25.2±3.52)%、(25.7±1.46)%,呈现一定程度的抑制细胞凋亡的活性。结论:重组EpoAB-NGF模拟肽融合蛋白具有与NGF类似的神经营养作用。 潘勇昭 陈虹 王欣 马晓骊 黄秉仁关键词:原核表达 神经营养