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结核分枝杆菌Rv3881c突变子的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达: 2007年; 目的:融合表达结核分枝杆菌Rv3881c突变子抗原,以便与其他已知的免疫显性抗原联合使用,有效增加结核分枝杆菌感染血清学检验的敏感性和特异性。方法:将克隆的来源于结核分枝杆菌H37Rv株的Rv3881c突变体基因插入原核表达载体pET24b,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达;由于重组的Rv3881c突变子抗原片段同C端的6×His标签融合表达,使用Ni-柱进行快速纯化。结果:Western印迹表明,重组的Rv3881c突变子抗原同选取的6例结核病阳性临床血清标本均能发生明显的反应。结论:重组Rv3881c突变体具有较好的特异性,提示该抗原可能成为检测结核的有效抗原之一。; 李邦印李大伟王臻吴雪琼王仲元王治伟韩慧新; 关键词：结核分枝杆菌融合蛋白大肠杆菌

人颗粒裂解肽片段在大肠杆菌中的表达: 2007年; 目的:建立颗粒裂解肽(NKG5)的原核表达载体系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:采用寡核苷酸合成、PCR扩增得到NKG5编码序列,克隆到pGEM-T载体上,经测序正确后,再切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组工程菌表达,采用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-NKG5融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量34000处有一条带。结论:获得了在大肠杆菌中低表达的颗粒裂解肽融合蛋白,为后续研究奠定了基础。; 李邦印王臻李大伟张灵霞王治伟; 关键词：颗粒裂解肽融合蛋白原核表达

分析结核病耐喹诺酮(gyrA)基因变化的规律被引量：4: 2008年; 目的研究结核分枝杆菌gyrA基因突变的规律。方法通过聚合酶链反应—单链构象多态性((PCR-SS-CP)技术鉴定156株临床分离株,确定为结核分枝杆菌的菌种,并进一步分析gyrA基因突变的情况。结果以结核分枝杆菌标准株为对照,147株临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。29株药物敏感株的gyrA基因SSCP图谱泳动均无异常;59株耐喹诺酮类药临床分离株中30株异常,占50.8%。结论结核分枝杆菌耐药与gyrA基因突变有关,且在药敏实验高、低浓度区均可发生。; 王金河李洪敏安慧茹梁建琴李邦印李秀芹; 关键词：喹诺酮 PCR-SSCP GYRA基因

结核分枝杆菌phoS2基因在大肠埃希菌中的高效表达及其产物抗原性分析: 2009年; 目的在大肠埃希菌中高效表达结核杆菌phoS2,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法采用DNA重组技术构建结核分枝杆菌phoS2抗原表达载体,用双酶切和PCR等方法鉴定转化子,重组质粒转化大肠埃希菌,诱导表达phoS2;用SDS-PAGE初步鉴定其表达量;将表达产物进行纯化;重组蛋白用Western blot分析其抗原性和特异性。结果phoS2基因在大肠埃希菌中得到高效表达,表达量占全菌蛋白的40%以上;重组蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应。结论重组phoS2蛋白在大肠埃希菌中主要以包涵体形式表达,有很好的抗原特异性和免疫原性,对结核病诊断有潜在的应用价值。; 苏锐李邦印王臻王仲元程小星张灵霞李国利; 关键词：大肠杆菌重组蛋白质类

结核菌抗原基因Rv3881c在大肠杆菌中的高效表达分析被引量：1: 2007年; 目的:从结核分枝杆菌基因组克隆Rv3881c基因并重组入pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白经纯化后通过Western blot分析初步鉴定其抗原性和特异性。方法:提取H37Rv标准株的基因组DNA,以基因组DNA为模板PCR扩增出Rv3881c基因,连接到pGEMT上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序正确的基因双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-48;在BL21菌株中优化表达并采用金属鏊合层析方法纯化蛋白;选取6例结核病阳性临床血清标本和6例健康人血清标本进行Western blot分析。结果:发现从保存的H37Rv菌株克隆得到了读码框完全正确的Rv3881c基因,它在大肠杆菌中可以高效表达,表达量约占细菌总蛋白的20/以上。重组蛋白不与健康人血清反应,可与结核标本血清有较强的免疫印迹反应。结论:重组Rv3881c具有较好的特异性,该抗原有潜力成为检测结核的有效抗原组分之一。; 李邦印李大伟王臻吴雪琼王仲元; 关键词：大肠杆菌重组融合蛋白质类 H37RV

Rv1196基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达: 2007年; 目的用PCR方法从结核菌基因组中扩增Rv1196基因,将之重组到pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白纯化后通过免疫印迹反应初步鉴定其抗原性和特异性。方法提取H37Rv标准株的基因组DNA;设计Rv1196基因两端的引物,通过PCR方法从基因组DNA中扩增出Rv1196抗原的基因,直接连接到pGEMT载体上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序的质粒用NdeI和XhoI双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-39;转化BL21并优化表达条件,采用金属鏊合层析纯化重组蛋白;选取7例结核病阳性临床血清标本和7例健康人血清标本进行W estern b lot分析。结果获得了氨基酸编码序列正确的基因,与数据库中报道一致;Rv1196基因能够在大肠杆菌中高效表达,其表达量约占细菌总蛋白的30%以上;重组抗原不与健康人血清反应,但与结核标本血清呈强烈反应。结论重组Rv1196抗原具有较好的特异性和抗原性,有较好的血清学分析价值。; 李邦印王臻李大伟王仲元吴雪琼李洪敏; 关键词：大肠杆菌基因表达

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李邦印