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表达varIBDV VP2基因的重组Meq基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用: 本发明公开了一种表达varIBDV VP2基因的重组<I>Meq</I>基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用。所述的重组<I>Meq</I>基因缺失马立克氏病病毒株是利用重组克隆技术，将包含CMV启动子序列、var...; 高玉龙陈运通刘长军祁小乐张艳萍刘永振王素艳崔红玉段雨路

马立克病病毒meq基因缺失毒株HN302Δmeq的构建及致病性分析: 2024年; 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN302为亲本毒株,成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析,证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达,并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线,结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,与亲本毒株HN302相比,HN302Δmeq对宿主无致病性,其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明,HN302Δmeq的毒力明显丧失,具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株,为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。; 张志会滕蔓刘金玲郑鹿平王伟东张文凯张多李林燕张卓柴书军柴书军罗俊; 关键词：马立克病病毒 MEQ基因

基于马立克病病毒Meq蛋白单克隆抗体的免疫组化诊断方法的建立: 2024年; 为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异性单克隆抗体,分别命名为MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10;Western blot结果证明这些单克隆抗体不仅能与体外表达的Meq蛋白反应,而且能识别MD肿瘤细胞系MSB-1中的Meq蛋白和MD肿瘤组织细胞中的Meq蛋白;以Meq蛋白单克隆抗体成功建立免疫组化诊断MD的方法,该方法特异性强,结果稳定,易观察判定。研究表明,试验制备了4株Meq蛋白单克隆抗体(MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10),基于此建立的免疫组化MD诊断方法为临床MD鉴别诊断提供技术支撑。; 王润锦孙英杰石彬吴少鹏邵红霞邵红霞叶建强钱琨; 关键词：马立克病单克隆抗体免疫组化

宁都黄鸡马立克氏病的诊断及其病毒meq基因克隆及序列分析: 2024年; 【目的】为诊断江西宁都某鸡场黄鸡发病原因。【方法】通过病理剖检、PCR检测确诊该鸡场黄鸡患马立克氏病,并对该病毒meq基因全序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析。【结果】病鸡表现“劈叉”神经症状,剖检结果发现病鸡的心脏、肝脏和脾脏等器官表面均出现大小不一的灰白色结节,腺胃糜烂、出血。PCR鉴定结果为马立克氏病病毒(marek’s disease virus,MDV)阳性,随后对MDV的meq基因进行了扩增、克隆和测序,MDV meq基因全长为1020bp。与参考毒株相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.8%~99.8%和97.1%~99.7%,存在9个氨基酸突变位点,其中有3段4-脯氨酸(PPPP)重复序列,2段发生(PPPP-PR/APP)氨基酸突变。【结论】该毒株与近年国内强毒株或超强毒株在同一分支上,且氨基酸突变基本相同,推测该分离毒株毒力至少为强毒株。研究为临床马立克氏病诊断提供理论依据,为分析MDV变异提供重要参考。; 吴虹瑾黄曼孜胡煜吴欢生高晓娜郭小权谢华丽; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因遗传进化

一株马立克病病毒特超强变异株meq基因编辑缺失候选疫苗毒株的构建与鉴定: 2024年; 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,该病可用疫苗进行预防和控制,但在长期免疫压力下MDV的毒力持续增强,经典MD疫苗已难以对当前流行的特超强MDV(HV-MDV)变异株提供良好的免疫保护,亟需研发新一代MD高效疫苗。本文以HV-MDV变异株HNSQ01为亲本毒株,在CEF上连续传代之后,利用CRISPR/Cas9系统对其meq基因进行编辑,通过一系列试验鉴定和分析,最终建立一株meq基因编辑缺失的MD疫苗候选毒株,命名为SQ01Δmeq。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,在77 d试验周期内,亲本毒株HNSQ01不仅严重抑制感染鸡生长并导致免疫抑制,而且导致100%的MD发病率、100%致死率及80%的肉眼观察肿瘤发生率;但SQ01Δmeq未引起感染鸡的生长及免疫抑制,而且MD发病率、致死率及肿瘤发生率均为0%,表明其对宿主无致病性,生物安全性良好。本研究建立的meq基因编辑缺失MDV毒株SQ01Δmeq,为后续研发新型高效的MD疫苗奠定了重要基础。; 张多滕蔓张卓刘金玲郑鹿平各思雨韩放罗琴柴书军柴书军余祖华赵东; 关键词：马立克病 MDV MEQ 新型疫苗

马立克病病毒特超强变异株meq基因缺失株构建及作为疫苗候选株的鉴定: 2024年; 马立克病(Marek’s disease,MD)是一种严重危害家禽健康养殖的免疫抑制病与肿瘤病,由致病性的血清1型MDV(Marek’s disease virus serotype 1,MDV-1)毒株感染引起。近年来,即使在已接种疫苗的鸡群中,MD病例的发生及危害在全球范围内仍呈不断上升趋势。此前研究发现,经典的MD疫苗已不能很好保护当前流行的MDV特超强毒株,尤其是新出现的特超强MDV(Hypervirulent MDV,HV-MDV)变异株,这意味着新一代高效的MD疫苗亟待研发。本研究中,以近期最新分离鉴定的HV-MDV变异株SDCW01为亲本毒株,首先将其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)上连续传代以降低对宿主潜在的免疫抑制性,然后利用基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术敲除致瘤基因meq,构建meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株。经过PCR扩增鉴定、病毒克隆纯化、DNA测序、间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及病毒体外增殖曲线测定等试验,证实获得一株meq基因完全缺失的MDV毒株,命名为SD01△meq。进一步传代培养及PCR鉴定结果显示,SD01△meq传代稳定性良好,meq基因的编辑缺失未发生回复突变,且不影响其它MDV基因的表达及体外复制能力。1日龄SPF鸡攻毒实验结果显示,与亲本毒株SDCW01相比,SD01△meq完全丧失了对宿主的免疫抑制和致病性,其诱导的MD发病率、致死率及肿瘤率均为0%。上述数据表明,本研究成功构建获得了一株meq基因编辑缺失疫苗候选毒株SD01△meq,为后续新型高效MD疫苗的研发奠定了重要基础。; 张卓樊剑鸣滕蔓张多刘金玲郑鹿平赵东赵东韩放罗琴柴书军罗俊; 关键词：马立克病病毒 MEQ基因新型疫苗

一株马立克病病毒基因编辑缺失疫苗株SD01Δmeq及构建和应用: 本发明提供了一株马立克病病毒meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株SD01Δmeq及构建和应用。本发明SD01Δmeq疫苗毒株保藏编号为：CGMCC NO.45862。该SD01Δmeq疫苗毒株的亲本毒株为MDV特超强中国变异...; 罗俊滕蔓张卓郑鹿平罗琴贾斌赵东程娜柴书军邢广旭

一株马立克病病毒双基因编辑缺失疫苗株SD01ΔmeqΔM11及构建和应用: 本发明提供了一株马立克病病毒meq和miR‑M11双基因编辑缺失的疫苗候选毒株SD01ΔmeqΔM11及构建和应用。该疫苗毒株保藏编号为：CGMCC NO.45863。本发明提供的SD01ΔmeqΔM11疫苗毒株的亲本毒...; 罗俊滕蔓张卓罗琴郑鹿平贾斌程娜赵东邢广旭柴书军

一株马立克病病毒基因编辑缺失疫苗株SQ01Δmeq及构建和应用: 本发明提供了一株马立克病病毒meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株SQ01Δmeq及构建和应用。本发明SQ01Δmeq疫苗候选毒株保藏编号为：CGMCC NO.45864。SQ01Δmeq疫苗候选毒株的亲本毒株为MDV特超强中...; 罗俊滕蔓张多郑鹿平罗琴贾斌邢广旭柴书军赵东程娜

ICU护士静脉用药错误知信行问卷(KAB-MEQ)的汉化及应用: 目的:1.汉化ICU护士静脉用药错误知信行问卷（Knowledge,Attitude,and Behavior in Medication Errors Questionnaire,KAB-MEQ）,并检验信效度。2.应...; 陈诗涵; 关键词：ICU护士知信行汉化

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