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- 一种重组腺相关病毒AAV-PIAS3(133-320)及其制备方法和应用
- 本发明涉及生物医药技术领域,具体公开了一种重组腺相关病毒AAV‑PIAS3(133‑320)及其制备方法和应用,所述重组腺相关病毒AAV‑PIAS3(133‑320)是将PIAS3(133‑320)基因同源重组连接至腺病...
- 杜彩萍蒋玉胡露露李盟王柏雪孟利陈柔柔张冰格
- 乳腺癌组织中STAT3、PIAS3和PIAS4的表达及意义
- 目的:检测STAT3、PIAS3、PIAS4在乳腺癌和癌旁乳腺组织中的表达,分析在乳腺浸润性导管癌中三者的表达与临床病理特征的关系,探究STAT3、PIAS3和PIAS4在乳腺癌发生、发展中的作用,为研发新的乳腺癌治疗靶...
- 申扬
- 关键词:STAT3PIAS3乳腺肿瘤
- 大鼠PIAS3蛋白表达、纯化及生物信息学分析
- 2022年
- [目的]构建大鼠His-PIAS3真核表达载体,将His-PIAS3于体外进行表达纯化,并对PIAS3进行生物信息学分析。[方法]采用分子克隆构建His-PIAS3-pcDNA3.1真核表达载体,之后转染入HEK293细胞进行表达,考马斯亮蓝染色检测整体蛋白变化,免疫印迹鉴定His-PIAS3蛋白表达及细胞整体蛋白SUMO化,镍柱纯化His-PIAS3蛋白。生物信息学方法分析大鼠PIAS3蛋白的理化性质、亲疏水性、二级结构及序列的保守性。[结果]His-PIAS3目的基因扩增成功,且亚克隆入pcDNA3.1载体;和空载体组相比,转染His-PIAS3-pcDNA3.1组PIAS3蛋白表达水平明显增加,且整体蛋白的SUMO化水平显著升高;镍柱纯化可获得较高纯度的His-PIAS3蛋白。生物信息学结果显示,大鼠PIAS3蛋白包含628个氨基酸残基,分子量为68.3 kDa,理论等电点为8.05,亲水性平均值为-0.242;PIAS3主要定位于膜内;PIAS3蛋白的二级结构主要由18.79%α-螺旋、13.69%延伸链和67.52%无规卷曲组成;不同物种间pias3序列相似性均在70%以上。[结论]His-PIAS3真核表达载体构建成功;His-PIAS3可在HEK293细胞中高效表达,具有较高酶活性;获得较高纯度His-PIAS3蛋白;PIAS3主要定位于核内,为碱性、亲水性不稳定蛋白,具有高度保守性。
- 孟利杜彩萍
- 关键词:蛋白纯化生物信息分析
- 神经型一氧化氮合酶(nNOS)与SUMO连接酶PIAS3相互作用结构基础鉴定被引量:6
- 2020年
- 神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在中枢神经系统广泛分布。本课题组前期研究报道,神经活性增强促进神经型一氧化氮合酶SUMO化,继而上调其活性,激活下游ERK1/2信号通路,参与调控兴奋性突触传递。SUMO连接酶PIAS3可通过其N-末端AAs 43~86与nNOS结合,参与介导神经型一氧化氮合酶SUMO化。本文进一步筛选和鉴定nNOS中与PIAS3结合的氨基酸序列,深入研究nNOS与PIAS3相互作用的结构基础。采用分子克隆技术,分别构建nNOS缺失结构域突变体(AAs 1~1396、1~756和1~720)的真核表达载体,然后分别与Myc-PIAS3质粒共转染于COS7细胞。结果显示,AAs 1~720与PIAS3共转染组nNOS-PIAS3的结合水平显著低于其他组;Myc-nNOS(AAs 721~756)化学合成小肽与纯化的His-PIAS3在体外也可相互结合。结果表明,nNOS的AAs 721~756(CaM结合结构域,CaMB)可与PIAS3直接结合。GST pull-down进一步证明,nNOS的CaMB与PIAS3 AAs 43~86可直接结合。构建CaMB-pcDNA3.1真核表达载体,共表达nNOS、Myc-PIAS3和CaMB,CaMB共表达组nNOS-PIAS3结合明显降低。结果提示,CaMB通过竞争结合PIAS3从而干预nNOS与PIAS3的结合。将化学合成的穿膜肽Tat融合的CaMB(Tat-CaMB,5μmol/L)与皮质神经元预孵育1 h,用荷包牡丹碱(bicuculline,50μmol/L)诱导化学性长时程增强(long-term potentiation,LTP)。结果显示,Tat-CaMB可显著逆转bicuculline诱导的ERK1/2磷酸化(活化)水平的升高,与荷包牡丹碱处理组相比,下降了29%(P<0.05)。结果表明,Tat-CaMB可通过干预nNOS-PIAS3结合,进而抑制神经型一氧化氮合酶SUMO化及其下游ERK1/2信号通路的活化。通过上述研究,证明nNOS可通过CaM结合结构域(AAs 721~756)与PIAS3结合,并提供了一种鉴定和验证蛋白质间相互作用结构基础的有效方法。
- 胡露露杜彩萍
- 关键词:神经型一氧化氮合酶PIAS3
- STAT3和PIAS3在大肠癌演变过程中的表达研究被引量:3
- 2019年
- 目的研究STAT3和PIAS3基因在大肠癌演变过程中的表达情况以及两者间的相互联系。方法以30例大肠癌患者、30例腺瘤患者、30例息肉患者为研究对象,大肠癌组织、腺瘤组织为实验组,息肉组织为对照组。应用免疫组化方法检测STAT3和PIAS3蛋白在大肠癌演变过程中的表达。研究结果采用IPP6.0系统测定平均吸光度,进行半定量分析。结果大肠癌组织STAT3及PIAS3蛋白的表达水平远高于腺瘤组织(P<0.05),且腺瘤组织的表达水平均远远高于息肉组织(P<0.05),差异有统计学意义。结论STAT3及PIAS3基因在大肠癌演变过程中表达水平逐次升高,可能提示其对大肠癌的发生发展起着重要的作用。
- 鄢明果程海涛王农荣
- 关键词:大肠癌STAT3PIAS3腺瘤息肉免疫组化
- PIAS3在胃癌组织中的表达及临床意义被引量:2
- 2019年
- 目的探讨PIAS3在胃癌(GC)组织中的表达及其与临床病理及预后的关系。方法选取2006年1月~2008年5月于我院确诊的112例GC患者的癌组织和配对癌旁正常胃黏膜组织分别作为研究组和对照组。采用免疫组化染色法检测PIAS3在GC组织和癌旁正常胃黏膜组织的表达水平,并分析PIAS3蛋白在GC组织表达水平与患者各临床病理学特征及预后的关系。结果 PIAS3蛋白在GC组织中的水平低于癌旁正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、Lauren分型的GC患者组织中PIAS3蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤浸润程度、淋巴结转移不同的GC患者组织中PIAS3蛋白水平比较差异无统计学意义(P<0.05);PIAS3水平不同的GC患者生存曲线比较差异无统计学意义(P<0.05);PIAS3低表达的GC患者死亡风险高于高表达患者(P<0.05)。结论 PIAS3蛋白在GC组织中呈低表达,其水平与肿瘤浸润、淋巴结转移及GC预后相关。
- 王文昌矫璐宇赵国伟王亮曹金
- 关键词:胃癌临床病理特征预后
- 原发性结肠癌细胞和结肠癌旁组织中PIAS3蛋白表达及其临床意义
- 目的:检测取自人体结肠癌及其癌旁正常组织病理切片中PIAS3蛋白的表达水平,研究原发性结肠癌细胞与结肠癌旁正常组织中PIAS3蛋白表达的差异性。同时通过与病理结果中的结肠癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移个数、肿瘤大小、病...
- 章毅
- 关键词:结肠癌病理分期预后评估
- 文献传递
- PIAS3不同亚型差别序列对PKM2信号的调控机制研究
- 肿瘤细胞和正常细胞相比,代谢方式显著不同。正常细胞通过有氧氧化的方式代谢,而肿瘤细胞采用糖酵解方式来分解葡萄糖并获得能量,这就是著名的Warburg效应。其中,丙酮酸激酶M2亚型是参与肿瘤Warburg效应的关键代谢酶,...
- 邱敏敏
- 关键词:肿瘤PIAS
- 下调miR-92a通过调控PIAS3抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积被引量:3
- 2018年
- 目的 探讨下调miR-92a对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积的影响及其机制。方法 以不同浓度(0、25、50、100 mg/L)的ox-LDL处理RAW264.7细胞24 h或以100 mg/L ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、12、24 h后,采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ox-LDL对miR-92a表达的影响。建立miR-92a低表达的RAW264.7细胞株,并给予100 mg/L ox-LDL处理后,用qRT-PCR、油红O染色、一氧化氮(NO)荧光探针(DAF-FMDA)和Western blot检测下调miR-92a表达对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β表达、脂质蓄积以及信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路相关蛋白p-STAT3、STAT3蛋白表达的影响。建立活化STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)和miR-92a低表达的RAW264.7细胞株,并给予100 mg/L ox-LDL处理后,观察沉默PIAS3表达对ox-LDL作用下miR-92a低表达的RAW264.7细胞中炎症因子、脂质蓄积以及STAT3信号通路的影响。TargetScan软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-92a和PIAS3的靶向关系。结果 随着ox-LDL作用时间和浓度的增加,RAW264.7细胞中miR-92a表达升高;双荧光素酶报告实验验证PIAS3是miR-92a的靶基因。采用ox-LDL处理后RAW264.7细胞中miR-92a、iNOS、IL-6、IL-1β、p-STAT3表达升高,NO释放增多和细胞内脂滴升高,而PIAS3的表达下降。这种调控作用可被anti-miR-92a所抑制;而沉默PIAS3后,anti-miR-92a的这一抑制作用得以恢复。结论 下调miR-92a可通过调控PIAS3抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积。
- 胡威威陈丽曼刘智芬
- 关键词:RAW264.7细胞氧化型低密度脂蛋白炎症介质脂质蓄积
- PIAS3在结肠癌组织和细胞中的表达及意义被引量:1
- 2017年
- [目的]观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。[方法]采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中PIAS3 m RNA及蛋白表达水平。[结果 ]结肠癌组织中PIAS3蛋白表达显著高于癌旁正常组织(χ~2=8.543,P=0.006);且表达强度随肿瘤病理分化程度的降低、Dukes分期的增高及肿瘤体积的增大而逐渐增高,差异有统计学意义(P均<0.05);PIAS3在结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中均有表达,其中COLO205细胞株中PIAS3蛋白及m RNA表达高于SW480和SW620细胞株(P<0.05)。[结论 ]PIAS3的表达水平以及活性与结肠癌的发生发展有关,可能为结肠癌的早期诊断及靶向治疗提供新的分子靶点。
- 李和平熬建萍杨政
- 关键词:PIAS3结肠肿瘤免疫组织化学
相关作者
- 何旺

- 作品数:6被引量:10H指数:2
- 供职机构:北京大学肿瘤医院
- 研究主题:PIAS3 前列腺癌 前列腺癌细胞 RNA干扰 凋亡
- 李鸣

- 作品数:76被引量:397H指数:10
- 供职机构:北京大学肿瘤医院
- 研究主题:前列腺癌 前列腺肿瘤 肾癌 肾肿瘤 膀胱癌
- 王东林

- 作品数:119被引量:1,126H指数:11
- 供职机构:重庆市肿瘤医院
- 研究主题:膈肌 非小细胞肺癌 融合基因 横纹肌肉瘤 肿瘤
- 纪华

- 作品数:23被引量:65H指数:5
- 供职机构:成都军区昆明总医院
- 研究主题:内生场热疗 放疗 PIAS3 人胶质瘤 肿瘤
- 李光辉

- 作品数:40被引量:89H指数:6
- 供职机构:第三军医大学新桥医院
- 研究主题:横纹肌肉瘤 人胶质瘤 鼻咽癌 转染 肺癌