国家科技型中小企业技术创新基金(10C26214414767)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：冉艳红赵峰李弘剑郑凤娇更多>>
- 相关机构：广州市恺泰生物科技有限公司暨南大学解放军第458医院更多>>
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- rhIL-12二硫键、N-糖基化位点及C端氨基酸序列分析被引量：2
- 2014年
- 重组人白细胞介素12(rhIL-12)是一种已经用于治疗肿瘤,寄生虫、病毒性感染及造血障碍等疾病研究的异二聚体糖蛋白。结构确证是质量控制的重要内容,此研究对CHO细胞表达的rhIL-12二硫键配对方式、N-糖基化位点以及C端氨基酸序列进行了分析,使用Trypsin、Chymotrypsin和Glu-C三种酶分别对rhIL-12进行非还原酶解,尽可能地在其所有半胱氨酸残基之间断裂而形成二硫键相连的肽段,然后使用LC-MS/MS对酶解后的肽段样品进行分析,确定了rhIL-12样品中存在和理论配对方式相符的7对二硫键。将rhIL-12二硫键还原后并烷基化修饰保护,分别采用Trypsin,Chymotrypsin和GluC进行酶解,并用LC-MS/MS对酶解后肽段进行了质谱肽图及C端氨基酸序列分析,确定了rhIL-12 p35亚基C端氨基酸序列的8个氨基酸、p40亚基C端氨基酸序列的15个氨基酸。对rhIL-12样品还原及烷基化后用Trypsin变性酶解,所得肽段在H2O及H218O水中分别用PNGase F糖苷酶处理酶切产物。并通过二级质谱分析脱糖后糖肽段分子量变化,从而确定了rhIL-12的3个N糖基化修饰位点,分别为p35亚基的71位和85位以及p40亚基的200位。通过建立酶解结合二级质谱鉴定的方法,证明了新药rhIL-12的二硫键位点、C端氨基酸序列和糖基化位点与理论一致。
- 赵峰张宜俊冉艳红王兴勇叶倩君李弘剑
- 关键词：二硫键
- 重组人白介素-12对辐射损伤脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STAT5、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨重组人白介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)对辐射损伤新生儿脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STAT5、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)表达的影响。方法收集16份新生儿脐带血,分离单个核细胞,经终浓度分别为0.01、0.1和1 ng/ml的rhIL-12处理24 h后,用直线加速器以4 Gy X射线单次照射24 h,用流式细胞仪分析CD34+造血干细胞的凋亡率;并观察CD34+造血干细胞经1 ng/ml rhIL-12体外活化15和30 min后,细胞内STAT5、STAT4和MAPK蛋白的表达水平。结果 rhIL-12对辐射损伤引起的新生儿脐带血CD34+造血干细胞凋亡具有明显的下调作用(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.01);rhIL-12与新生儿脐带血CD34+造血干细胞共同孵育15和30 min,均可显著上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平(P<0.01或<0.001),下调STAT4蛋白的表达水平(P<0.05或<0.01),且均呈时间依赖性(P<0.001或<0.05)。结论 rhIL-12对辐射损伤的新生儿脐带血造血干细胞具有抗凋亡作用,并能上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平。
- 郑凤娇王翠玲王增松郭桂铃李文棠谢飞群牛丽红罗群方张宜俊
- 关键词：白细胞介素-12造血干细胞STAT5STAT4丝裂原活化蛋白激酶
