中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(SKLVBP200819)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：张艳萍闫福海刘爱玲刘长军张锋更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马立克氏病病毒“814”疫苗株基因组重复区序列测定及分析
- 2010年
- 为了解马立克氏病病毒(MDV)强、弱毒株主要致肿瘤相关基因变异情况,本研究根据MDV GA株基因组序列,设计合成扩增基因组重复区的引物,得到MDV814疫苗株病毒基因组中约26kb的序列片段。与GenBank登录的强、弱毒株进行比较分析表明,扩增的MDV1型814疫苗株的长重复区为12774bp,预测的开放阅读框(ORF)有48个;短重复区为11426bp,预测的ORF有38个。发现了4个MDV814株特有的ORF。814株在编码Meq、RLORF6和23ku的重叠基因内具有类似于疫苗株CVI988的177bp的插入;在RLORF12基因编码区内存在69bp的缺失,该缺失位于病毒复制起始位点内。同时,发现7个814疫苗株特有的氨基酸突变,分布在6个ORF内。单核苷酸多态性(SNP)的鉴定发现,多个基因具有单核苷酸的突变,主要分布于Meq基因,其中氨基酸A115V(丙氨酸-缬氨酸),N142D(天冬酰胺-天门冬氨酸)的变异是814疫苗株所特有的。MDV814疫苗株重复区的基因序列的比较分析将有助于MDV致肿瘤机制的研究。
- 张锋刘长军张艳萍刘爱玲闫福海候广玉丛锋
- 关键词：马立克氏病病毒基因
- 鸡马立克氏病病毒流行毒株高代次细胞毒株Meq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因变异分析被引量：6
- 2009年
- 根据鸡马立克氏病病毒（Marek′s disease virus,MDV）GA株的全基因组序列,设计合成了用于扩增MDVMeq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因的引物,分别扩增4株MDV流行强毒株的高代次细胞毒株（L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C）及相应亲本毒株（L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY）、MDV强毒J-1株、814疫苗株等10个毒株的Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因。经克隆测序后,分析4个高代次细胞毒株中相应基因的变异,并与MDV强毒J-1株、814疫苗株及GenBank中已发表MDV毒株的相应序列进行比较。序列比对分析发现,L-CZp75C株Meq基因的第625位存在碱基C插入突变;L-ZYp75C株Meq基因第529位存在碱基C插入,且第602位缺失碱基T,从而致使Meq基因推导的相应氨基酸序列在第177~200位发生移码突变。L-SYp85C株RLORF4基因在第215~265位缺失51bp,致使该基因推导的氨基酸序列相应缺失17个氨基酸残基。分析RLORF12基因序列,发现L-MSp75C株在第67位存在碱基T缺失,814疫苗株在第18~86位缺失69 bp,缺失位置均位于复制起点（Origin of replication,,Ori）内;而L-ZYp75C毒株在RLORF12基因第168~174位存在独特的TGTTGGG碱基缺失。4个细胞高代次毒株的132 bpr基因的扩增结果表明,该基因在病毒基因组中的拷贝数明显增加,可达到10个拷贝以上。上述分析结果提示,4株MDV流行强毒株经体外连续传代后,MDV致瘤相关基因Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因等发生了缺失突变或插入突变。
- 刘爱玲刘长军张艳萍李晶梅施维松闫福海张锋程志伟
- 关键词：马立克氏病病毒MEQ
- 鸡马立克病毒流行强毒株的致弱研究被引量：1
- 2010年
- 针对马立克病毒(MDV)毒力逐渐上升的现状,本研究对国内MDV流行强毒株进行了致弱研究。本实验采用近年来从东北、四川2地区免疫发病鸡场中分离的4株MDV流行强毒株(L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY),经噬斑纯化后,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养至75代～85代,获得了4株高代次细胞毒株(L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C)。并分析了L-SYp85C和L-MSp75C毒株的体外、体内生长特性和对SPF鸡的致病力。结果表明,L-SYp85C和L-MSp75C株在CEF适应性显著提高;以10倍感染剂量感染的SPF鸡,在12周内均未发生MD肿瘤,体重平均值与对照组体重平均值差异不显著;检测7d～45d羽髓中病毒载量,均低于106copies/106cell,显著低于亲本毒株。同时,4株传代毒株132bpr基因拷贝数显著增加。上述结果为MDV强毒株的致弱研究以及进一步筛选MDV弱毒疫苗株提供了实验依据。
- 刘爱玲刘长军张艳萍闫福海张锋
- 关键词：马立克病毒鸡胚成纤维细胞增殖能力
- 鸡马立克病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定被引量：3
- 2009年
- 用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病（MD）鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞（DEF），蚀斑克隆纯化后，随机选1个单克隆，再接种DEF增殖，获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒（MDV）野毒株，分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ、QQHE和DH。应用PCR技术分别扩增这9株MDV的132bp重复序列（132bpr），发现这9株132bpr均为2个拷贝，符合致病型MDV的特点。从分离的9株MDV中选择5株，人工感染7日龄SPF白来航鸡。试验鸡表现精神萎靡，被毛凌乱，个体瘦小；60d后剖杀，大多可见内脏肿瘤；SY、FY、QQHE3株的MD临床阳性率达100％。
- 张艳萍刘长军李晶梅刘爱玲施维松闫福海秦运安
- 关键词：马立克病病毒鸭胚成纤维细胞
