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仿刺参酸性磷酸酶的提取及粗酶性质研究被引量：8: 2009年; 试验结果表明,仿刺参酸性磷酸酶的最佳提取缓冲液为pH 7.5的Tris-HCl缓冲液,最佳沉淀条件为饱和度为80%的硫酸铵。仿刺参体壁和肠道中的酸性磷酸酶最适反应条件均为:40℃,pH4.0。Ca2+、Mg2+和Mn2+对体壁酸性磷酸酶有激活作用,而Fe3+、Fe2+、Zn2+、Cu2+、Ba2+对其有抑制作用,其中Cu2+的抑制作用最强;肠道酸性磷酸酶表现的特征与之类似,但Zn2+的抑制作用最强。PAGE电泳结果表明,仿刺参体壁和肠道中的酸性磷酸酶类型不同,肠道中有3种同工酶。; 于建伟李冬梅李吉龙朱蓓薇; 关键词：仿刺参酸性磷酸酶

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化被引量：8: 2010年; 为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。; 于蕾朱蓓薇孙黎明周大勇秦磊; 关键词：海参组织蛋白酶B

海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定被引量：6: 2009年; 通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程的手段表达出具有活性的重组SjCL,为进一步研究组织蛋白酶L在海刺参自溶过程中的作用提供理论基础。; 鄢荣歆徐赛涛丛丽娜杨冠科朱蓓薇; 关键词：组织蛋白酶L RT-PCR

海参体壁组织蛋白酶B酶学性质的研究被引量：8: 2008年; 提取并研究了海刺参体壁组织蛋白酶B的酶学性质,结果表明,该酶最适反应pH为5.5,最适反应温度为40℃,在20℃～30℃酶活稳定,金属离子Ca2+、Mg2+、K+、Mn2+、Fe2+、Cu2+和Zn2+均能抑制酶活,其中Ca2+、Mg2+作用微弱,而Zn2+可完全抑制酶活;碘乙酸、EDTA对酶具有一定的抑制作用,亮抑酶肽、抗痛素和E-64对酶可完全抑制。DTT和L-半胱氨酸对酶有一定的激活作用。; 赵露露董秀萍于蕾张蕾朱蓓薇; 关键词：海参组织蛋白酶B 酶学特性

海刺参(Stichopus japonicus)电压依赖性钙离子通道β亚基基因及其编码产物的结构特点被引量：3: 2009年; 电压依赖性钙离子通道(voltage-dependent calcium channels,VDCC)是细胞膜上控制Ca2+进入胞内的特殊蛋白质,VDCCβ亚基具有调节其通道活性的作用.使用RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到电压依赖性钙离子通道β亚基(SjCaβ)基因,所得序列提交GenBank,登录号EU853658.该基因全长1 867 bp,包含1个1 614 bp的开放阅读框(ORF),编码537个氨基酸.将SjCaβ与多种无脊椎动物钙离子通道β亚基进行分析比较,发现它们有较高的同源性,并具有钙离子通道β亚基基因内保守的2个功能区域,即SH3功能区(src-homology 3 domain)和GK功能区(guanylate kinase domain).在功能区域附近还具有电压依赖性钙离子通道β亚基特有的BID区(βinteraction domain),氨基酸保守序列为PYDVVP-RP---VGPSLKGYEVTDMMQKALFDF,进一步确定了得到的cDNA序列为海刺参电压依赖性钙离子通道β亚基.对SjCaβ的二级结构进行了预测,构建了系统进化发育树,并运用同源建模法构建了SjCaβ的三维结构模型.研究结果对深入研究海刺参离子通道的结构以及在信号传导过程中的作用有着重要意义,并为研究海刺参自溶等问题提供一定的理论基础.; 杨冠科丛丽娜谢三群张宗申朱蓓薇; 关键词：Β亚基

仿刺参cDNA文库构建以及序列分析被引量：5: 2007年; 应用Gubler-Hoffman cDNA Library Construction技术,构建仿刺参(Apostichopus japonicus)cDNA文库.测试结果表明,库容量为2.0×106 pfu/mL,利用PCR方法检测cDNA文库插入DNA片段的大小,其长度范围在0.5～4.1 kb,插入片段平均长度为1.3kb,表明该文库达到建库要求,可用来筛选低丰度mRNA的基因克隆.随机挑选100个1kb以上的cDNA克隆进行测序分析,发现有25条EST序列和网上公布的其他物种的序列相似性较高,这些基因与刺参能量代谢和蛋白水解相关.其中发现的几个重要基因,如编码遍在蛋白以及缬酪肽蛋白等的基因,可能与仿刺参自溶过程的蛋白酶水解和细胞凋亡事件相关,进一步的研究还在进行.另有49条EST序列相似性较低,推测可能是功能未知的新基因.仿刺参cDNA文库的成功构建,为下一步大量EST序列分析和功能性新基因的发现,以及从基因水平认识仿刺参这一特殊棘皮动物的生长、发育和代谢规律奠定了基础.; 徐赛涛丛丽娜朱蓓薇; 关键词：仿刺参 CDNA文库蛋白水解

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究被引量：30: 2007年; 从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.; 刘程惠朱蓓薇董秀萍陈立国; 关键词：海参反相高效液相色谱

海参肠中溶菌酶的分离纯化及其酶学性质被引量：27: 2008年; 从海参肠中分离纯化溶菌酶，并测定其酶学性质及抑菌作用。在4℃下将海参肠打浆，用Tris-HCl缓冲液抽提。上清液经浊点萃取法（CPE）浓缩、阳离子交换柱（CM52纤维素）层析和SephadexG-75凝胶过滤层析分步纯化，得到电泳纯的溶菌酶。该酶的比活力达到3026．1U／mg，纯化倍数为18．7，活力回收为46．0％。对纯化的溶菌酶性质研究表明，该酶相对分子质量约为16000，对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃，最适作用pH6．5，在45℃以下和pH4．O～8．0都有较好的稳定性，并与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性。与通常从蛋清中提取的溶菌酶相比较，从海参中分离纯化的溶菌酶具有广谱杀菌功能，即对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌细胞壁均有溶解作用。; 李英辉丛丽娜朱蓓薇; 关键词：海参溶菌酶分离纯化

采用原子力显微镜研究刺参体壁酶促溶性胶原蛋白的溶液聚集状态被引量：1: 2011年; 为研究刺参热加工过程中体壁胶原蛋白的物性变化规律,利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)考察样品浓度、溶剂和热处理条件对刺参体壁酶促溶性胶原蛋白(pepsin-soluble collagen,PSC)溶液聚集状态的影响。结果表明:在乙酸缓冲液(pH2.7)、PBS缓冲液(pH7.2)和超纯水中,海参体壁酶促溶性胶原蛋白均随着浓度的增大而逐渐开始自组装,并最终形成无规则的团状结构或者片状网络结构。但是,溶剂不同,其开始自组装所需要的胶原蛋白浓度也不同。随着加热温度的升高或加热时间的延长,刺参体壁酶促溶性胶原蛋白分子逐渐聚集成网络结构,但加热温度超过100℃或时间超过2 h后,其交联程度逐渐降低,网络结构逐渐消失。; 董秀萍朱蓓薇祁立波郑杰张爽姜丹; 关键词：PSC AFM

海参体壁酶促溶性胶原的提取工艺被引量：9: 2008年; 以海参体壁为原料,采用胃蛋白酶水解法提取酶促溶性胶原。以酶促溶性胶原得率为指标,通过正交试验确定了胃蛋白酶水解法获取酶促溶性胶原的最佳条件:温度为4℃,酶加量为14%,料液比为1∶500,提取时间为72 h;在此条件下酶促溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的73.44%。实验还确定盐浓度为0.8 mol/L时酶促溶性胶原的盐析效果最好。; 李翠翠董秀萍高杨姜丹朱蓓薇; 关键词：海参胶原

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