国家自然科学基金(81071790)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 两种等位基因特异性扩增方法在结肠癌K-ras癌基因点突变检测中的应用比较(英文)
- 2012年
- 针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点,提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Allele specific amplification,ASA)方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增,只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物,该产物能与双链DNA染料SYBR GreenⅠ结合,产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA,整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变,其中有15例检出为阳性。此外,还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测,并对两种方法进行了比较。结果显示:实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点,为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。
- 朱德斌张岚
- 关键词：SYBR结肠癌点突变
- 利用FRET技术实时检测Bid蛋白在TNF-α诱导PC12细胞凋亡过程中的作用
- 2012年
- 】目的在活细胞中实时检测TNF-α诱导PCI2细胞凋亡过程中Bid蛋白的作用并探讨PCI2细胞凋亡的信号通路。方法利用基于荧光共振能量转移（nuoreseence resonance energyt ransfer，FRET）原理设计的荧光探针pFRET-Bid（YFP-Bid-CFP）转染PC12细胞后，在激光共聚焦显微镜下实时检测Bid蛋白的切割情况，并采用专用软件进行数据分析。结果TNF-α诱导细胞凋亡的过程中，在短时间内（3h）就凋亡的细胞中观测不到bid的切割，而在8h后凋亡的细胞中却观测到了bid的切割。结论通过分析实验结果推测不同时间凋亡的细胞经过的信号通路是不同的，一个是不通过线粒体的较快途径，一个是需要通过线粒体的较慢途径。
- 张岚朱德斌
- 关键词：TNF-ΑFRET
