暨南大学药学院中药学教研室
- 作品数：35 被引量：348H指数：12
- 相关作者：汪甜吕辰鹏孙影奉水旺更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省高等学校中药有效性与安全性重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 补骨脂素对HL60细胞凋亡及细胞内Ca^(2+)浓度影响的探讨被引量：20
- 2006年
- 目的:探讨补骨脂素对HL60细胞凋亡的影响,以及细胞内Ca2+浓度与凋亡之间关系。方法:采用MTT比色分析法测定补骨脂素对HL60的细胞毒性影响,流式细胞仪及激光共聚焦显微镜测定HL细胞内Ca2+浓度和凋亡比率。结果:补骨脂素对HL60细胞生长具有抑制作用,补骨脂素促进细胞凋亡比率,细胞凋亡与Ca2+浓度成正相关。结论:补骨脂素影响HL60细胞凋亡,Ca2+介导的细胞凋亡是补骨脂素抑制肿瘤细胞生长的可能机制之一。
- 蔡宇陈冰张荣华杨燕霞
- 关键词：补骨脂素HL60细胞凋亡CA^2+
- 建立大鼠骨髓间充质干细胞稳定分离培养体系与鉴定被引量：64
- 2009年
- 背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2005-08/12在暨南大学完成。材料:SPF级3月龄SD雌性大鼠5只,由中山大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠双下肢,低糖DMEM培养液冲出骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,培养14d。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,采用碱性磷酸酶染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力,以甲苯胺蓝染色鉴定成软骨能力。结果:与密度梯度离心法相比,全骨髓贴壁法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化。第3代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,不表达造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45,表达整合素家族成员CD29和黏附分子CD44,经诱导后碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色均呈阳性。结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓间充质干细胞,效果优于密度梯度离心法。经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为大鼠骨髓间充质干细胞。
- 杨丽张荣华谢厚杰蔡宇黄丰
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 补肾活血中药复方对去卵巢大鼠骨密度和骨组织神经肽Y的影响被引量：7
- 2015年
- 目的探讨补肾活血中药复方对去卵巢大鼠骨密度及血浆和骨组织神经肽Y(NPY)的影响及对防治骨质疏松的作用机制。方法选择6月龄SD雌性大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、补肾活血中药复方低剂量组和高剂量组。模型组、复方低剂量组与高剂量组均行双侧去卵巢手术,手术1 w后中药复方低、高剂量组用灌胃法1.16 g/100 g和10.44 g/100 g给服中药,模型组灌服生理盐水,12w后观察各组大鼠骨密度的改变,采用实时荧光定量(RT-PCR)检测骨组织NPY m RNA的表达美联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血浆和骨组织NPY含量,Western印迹检测骨组织NPY的表达。结果与假手术组比较,模型组骨密度明显降低(P<0.01),骨组织中NPY蛋白和m RNA的表达量明显升高(P<0.01),血清和骨组织中NPY的含量也明显升高(P<0.01)。中药复方低剂量和高剂量组骨密度明显高于模型组(P<0.01),血浆和骨组织中NPY蛋白和m RNA的表达量明显降低(P<0.01或0.05),但仍高于假手术组(P<0.01)。结论补肾活血中药复方能够调节血浆和骨组织的NPY,这可能是其抗骨质疏松的作用机理之一。
- 朱晓峰王廷春杨丽王攀攀张荣华
- 关键词：骨质疏松
- 淫羊藿苷对大鼠间充质干细胞骨向分化过程中转化生长因子β_1、骨形态发生蛋白2表达的影响被引量：23
- 2010年
- 背景:淫羊藿苷作为补肾中药淫羊藿的主要有效成分,能够有效促进间充质干细胞向成骨细胞分化。目的:观察淫羊藿苷在诱导间充质干细胞骨向分化过程中对转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响,阐释其可能的诱导机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞;以20mg/L淫羊藿苷作为间充质干细胞药物干预浓度,根据干预条件的不同将实验分为:空白组、经典组(加经典成骨诱导剂)、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组;ELISA法检测各组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达。结果与结论:经典组、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2值均高于空白组(P<0.05);各组第7天的转化生长因子β1值高于14,21d(P<0.01),各组不同诱导时间骨形态发生蛋白2值之间相比差异无显著性意义(P>0.05)。提示上调转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达量可能是淫羊藿苷诱导各组促进间充质干细胞骨向分化的作用机制之一。
- 杨丽张荣华朱晓峰蔡宇黄丰
- 关键词：淫羊藿苷骨髓间充质干细胞转化生长因子Β1骨形态发生蛋白2
- 雌激素受体信号通路介导的槲皮素调控骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化研究被引量：12
- 2020年
- 目的:研究槲皮素(QUE)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨及成脂分化的影响,及雌激素受体(ER)信号通路对其的调控作用。方法:全骨髓贴壁法提取大鼠BMSCs;细胞形态学及表面抗原鉴定BMSCs;CCK8法测定QUE对BMSCs活力的影响;碱性磷酸酶(ALP)法及ELISA法分别检测QUE干预BMSCs后细胞培养上清液中ALP和BGP的表达;加入ER阻断剂ICI182780,Western blot及实时荧光定量PCR法检测正常及ER阻断后QUE对BMSCs成脂及成骨分化相关因子表达的影响。结果:细胞呈长梭形、多角状,表面抗原CD29阳性率99.93%,CD45阳性率3.20%;综合不同浓度QUE对BMSCs增殖和成骨分化影响,选取10^(-5)mol/L QUE进行后续实验。QUE能促进RUNX2及ALP的表达,抑制PPARγ及C/EBPα的表达(P<0.05);与QUE组比较,QUE与ICI182780联用后可显著抑制ALP的表达,促进PPARγ的表达(P<0.05),但RUNX2与C/EBPα的蛋白及mRNA变化不一致。结论:QUE促进BMSCs成骨分化、抑制成脂分化,可能是通过ER信号通路介导完成。
- 李小云杨丽张荣华
- 关键词：槲皮素成脂分化
- 柚皮苷在促大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化过程中对MAPK信号通路的影响被引量：21
- 2012年
- 目的:研究中药单体柚皮苷(NG)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化过程中MAPK信号通路的影响。方法:观察在正常、加入p38、ERK和JNK通路抑制剂SB203580、PD98059、SP600125及3种抑制剂全部加入的情况下,各组碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、I型胶原(Col I)等骨向分化指标的差异。用Western blotting技术检测各组p38、ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,用荧光定量PCR技术检测细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白2(BMP-2)和核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA的表达。结果:(1)10-7mol/L为本实验中NG的最佳促骨向分化浓度。(2)NG最佳浓度组的ALP和BGP含量比其它各组都高(P<0.05),Col I含量无明显差异(P>0.05);与NG组相比,加入不同抑制剂组的ALP、BGP和ColⅠ表达量出现不同程度的降低。(3)与空白组相比,NG组JNK蛋白的磷酸化水平升高(P<0.05),p38蛋白的磷酸化水平降低(P<0.01),ERK1/2蛋白的磷酸化水平无明显差异(P>0.05)。与NG组相比,加入不同抑制剂组的p38、ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平有升高也有降低。(4)NG组上调BMP-2的表达(P<0.05),下调Cbfα1的表达(P<0.05),而对TGF-β1的表达无明显影响(P>0.05)。与NG组相比,加入不同抑制剂组的TGF-β1、BMP-2和Cbfα1 mRNA表达量出现不同程度的降低。结论:NG主要通过激活MAPK信号通路中ERK通路、JNK通路以及上调BMP-2的表达,促进MSCs的骨向分化。NG上调BMP-2的表达受MAPK通路中p38通路的影响较大。
- 汪甜杨丽张荣华
- 关键词：柚皮苷骨髓间充质干细胞骨向分化MAPK信号通路
- 益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及相关机制研究
- 目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨保护蛋白(OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松的作用机理。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分...
- 朱晓峰王廷春张荣华孙升云韩莉王攀攀杨丽
- 关键词：益骨胶囊成骨细胞分化骨形态发生蛋白2骨保护蛋白
- 文献传递
- 益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织cbf α-1mNRA表达的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:分析成骨细胞分化因子cbf α-1基因在去卵巢骨质疏松(OP)大鼠的表达水平,观察益骨胶囊的调节作用。方法:将36只10月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组,相应干预后,留取股骨,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术测定cbf α-1 mRNA表达,以GAPDH基因为内参照,根据相对定量公式(2-ΔΔCt)分别计算模型组、药物组与假手术组表达差异倍数。结果:根据相对定量公式分析显示:与假手术组相比,模型组大鼠骨组织中cbf α-1 mRNA表达下降(P<0.01)。而药物组cbf α-1 mRNA表达相当于假手术组的0.19-0.92倍(P>0.05),明显高于模型组(P<0.05)。结论:结果表明去卵巢OP模型大鼠骨组织cbf α-1基因表达降低,而益骨胶囊可上调cbf α-1的基因表达水平,这可能与其诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞发挥其防治OP的作用有关。
- 黎波张荣华
- 关键词：骨质疏松卵巢切除术CBF益骨胶囊
- TNF-α对共育体系中成骨细胞凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞(OB)凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用。方法:(1)将20只10月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组,制备含药血清与空白血清;(2)将分离的OB与破骨细胞(OC)分别接种到共育体系中,加培养液培养后,同时添入20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L、60μg/LTNF-α分别作用24h、48h、72h诱导OB凋亡,用DNA电泳法确定最佳诱导方案;(3)将细胞分为TNF-α组、TNF-α+含药血清组、TNF-α+空白血清组和正常对照组,分别加入DMEM培养液、含药血清培养液、空白血清培养液、DMEM培养液,除正常对照组加入PBS外,其它各组均同时加入60μg/LTNF-α,培养72h后,用荧光染色法、DNA电泳法、流式细胞仪观察各组OB凋亡情况。结果:(1)60μg/LTNF-α作用72h后,共育体系中OBDNA电泳呈较典型的梯形改变;(2)TNF-α+含药血清组中OBDNA电泳仅出现二个条带,荧光染色可见大多数细胞均匀染色,其凋亡率(9.60%±0.26%)明显低于TNF-α组(26.90%±0.06%)与TNF-α+空白血清组(18.10%±0.06%),P<0.01。结论:60μg/LTNF-α作用72h可诱导共育体系中OB凋亡;益骨胶囊含药血清对TNF-α诱导的OB凋亡具有抑制作用。
- 傅淑平张荣华徐立群
- 关键词：肿瘤坏死因子益骨胶囊成骨细胞
- 益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及BMP-2和OPG的影响被引量：9
- 2012年
- 目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)和骨保护蛋白(osteopro-tegerin,OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为益骨胶囊高、中、低剂量组及空白组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清。二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,传代后分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组。模型组用AGEs(400mg/L)处理,中药低、中、高剂量组分别用AGEs(400mg/L)和低、中、高剂量含药血清共同处理,分别用pNPP、ELISA、茜素红染色法检测成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)、骨钙素(bone gla protein,BGP)以及矿化结节,RT-PCR测定成骨细胞中BMP-2、OPG mRNA的表达,ELISA法检测BMP-2、OPG蛋白的表达量。结果原代分离培养的新生大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞特征;与空白对照组比较,模型组成骨细胞(OB)ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达降低,矿化结节减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达升高,矿化结节增加,且随剂量增加而明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论益骨胶囊含药血清提高AGEs作用下成骨细胞分化和矿化能力,提高BMP-2、OPG的表达,这可能是益骨胶囊防治OP的机制之一。
- 朱晓峰王廷春张荣华孙升云韩莉王攀攀杨丽
- 关键词：益骨胶囊成骨细胞分化骨形态发生蛋白2骨保护蛋白
