刘衬丽
- 作品数：7 被引量：19H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
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- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6的克隆、序列分析和组织表达被引量：14
- 2009年
- 本文利用RT-PCR和RACE方法,获得了家蚕Bombyxmori丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(serpin)的开放读码框(ORF)和5′UTR序列。根据该基因与其他昆虫serpin的同源性关系将其命名为家蚕serpin-6基因,GenBank登录号EU159447。为了研究serpin-6与家蚕免疫反应的相关机理,对serpin-6基因的组织表达和免疫刺激反应进行了研究。结果表明该基因在家蚕的头部和生殖腺中mRNA表达量非常高,在中肠,脂肪体,丝腺和血淋巴表达量较低。用脂多糖(LPS)刺激5龄第3d家蚕后,serpin-6基因在脂肪体和血淋巴中都被显著诱导表达,且都在刺激6h后表达量最高。推测该基因在家蚕细胞免疫反应中起着一定的作用。
- 刘衬丽王东李兵管京敏俞燕芳査宏贤査宏贤许雅香
- 关键词：家蚕基因克隆半定量RT-PCR免疫反应
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Serpin-6的克隆、序列分析及表达研究
- 本研究以大造家蚕为材料,取5龄3天的家蚕头部、中肠、脂肪体、丝腺、精巢、卵巢和血淋巴。以家蚕脂肪体cDNA为模板克隆家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂/(Serpin-6/)基因;以头、中肠、脂肪体、丝腺、精巢、卵巢和血淋巴cDNA...
- 刘衬丽
- 关键词：家蚕克隆原核表达
- 文献传递
- 家蚕基质金属蛋白酶基因Bm-MMP的克隆、序列分析及表达研究被引量：1
- 2009年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)家族是一类蛋白水解酶,能够降解基底膜和细胞外基质中大部分蛋白质。为了研究MMPs对家蚕Bombyxmori基本生理功能的影响,本文利用RACE和RT-PCR方法,首次从家蚕蛹中克隆了一个MMP基因的全长cDNA,命名为Bm-MMP。序列分析表明,Bm-MMP的mRNA存在两个选择性剪切变体,分别命名为Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2。其中Bm-MMP-V1cDNA全长为2257bp,包含一个1686bp的开放阅读框,编码561个氨基酸,预测蛋白质分子量约为62.3kD;Bm-MMP-V2cDNA全长为2188bp。同源性分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2的氨基酸序列与蜡螟Galleria mellonella的Gm1-MMP的氨基酸序列同源性最高,均为88.8%;与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm1-MMP的氨基酸序列同源性,分别为61.2%和64.3%。将Bm-MMP-V1的编码区连接到表达载体pET28a(+)上,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,带有6×His标签的融合蛋白被成功表达。半定量RT-PCR分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在4龄眠蚕、熟蚕、吐丝后36及48h、预蛹中的表达量比5龄中食期与化蛹后的表达量高,推测该基因与家蚕幼虫蜕皮变态有关;LPS诱导5龄3d的幼虫,其Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在血液中的表达量升高,推测Bm-MMP可能与免疫相关。本研究为进一步研究Bm-MMP在家蚕体内的作用机制奠定了基础。
- 管京敏李兵王东刘衬丽沈卫德
- 关键词：家蚕RACE半定量RT-PCR
- 对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法
- 本发明公开了一种对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法。它以患对虾白斑杆状病毒病的存活的患病虾或新鲜的病死虾为样品，先用无菌水清洗后，再置样品于加热器皿中，加无菌水浸没至2～3cm，加热至沸腾，保持8～10min，加入TN...
- 许雅香张茂友沈卫德朱玉芳李兵刘衬丽
- 文献传递
- 对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法
- 本发明公开了一种对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法。它以患对虾白斑杆状病毒病的存活的患病虾或新鲜的病死虾为样品，先用无菌水清洗后，再置样品于加热器皿中，加无菌水浸没至2～3cm，加热至沸腾，保持8～10min，加入TN...
- 许雅香张茂友沈卫德朱玉芳李兵刘衬丽
- 文献传递
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Serpin-6的原核表达
- 为了研究家蚕(Bombyxmori)丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Serpin-6)在大肠杆菌中的表达情况,本研究将获得的家蚕Serpin-6基因去信号肽后,设计两对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的特异引物,对cDNA编码区...
- 刘衬丽査宏贤王东李兵管京敏俞燕芳许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕
- 文献传递
- 野桑蚕羧酸酯酶基因(BmmCarE-2)的克隆及表达分析被引量：3
- 2008年
- 羧酸酯酶参与昆虫对有机磷和氨基甲酸酯等杀虫剂抗性的产生。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了一个野桑蚕羧酸酯酶全长基因(BmmCarE-2)。序列分析表明该基因包含1个1 623 bp的开放读码框,有57 bp的cDNA5′端非翻译区序列(5′UTR)和79 bp的cDNA3′端非翻译区序列(3′UTR),编码540个氨基酸,GenBank登录号为EU328351。序列比对分析表明BmmCarE-2与家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-2(GenBank登录号:DQ311250)的氨基酸序列相似性最高,达98.9%。利用半定量RT-PCR进行组织表达分析表明,BmmCarE-2在野桑蚕幼虫的头部和脂肪体表达量较高,在丝腺和中肠稍低,而在血液中的表达量最低。
- 王东李兵王燕红刘衬丽赵华强许雅香沈卫德
- 关键词：野桑蚕CDNA末端快速扩增
