管京敏
- 作品数：4 被引量：23H指数：2
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- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6的克隆、序列分析和组织表达被引量：14
- 2009年
- 本文利用RT-PCR和RACE方法,获得了家蚕Bombyxmori丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(serpin)的开放读码框(ORF)和5′UTR序列。根据该基因与其他昆虫serpin的同源性关系将其命名为家蚕serpin-6基因,GenBank登录号EU159447。为了研究serpin-6与家蚕免疫反应的相关机理,对serpin-6基因的组织表达和免疫刺激反应进行了研究。结果表明该基因在家蚕的头部和生殖腺中mRNA表达量非常高,在中肠,脂肪体,丝腺和血淋巴表达量较低。用脂多糖(LPS)刺激5龄第3d家蚕后,serpin-6基因在脂肪体和血淋巴中都被显著诱导表达,且都在刺激6h后表达量最高。推测该基因在家蚕细胞免疫反应中起着一定的作用。
- 刘衬丽王东李兵管京敏俞燕芳査宏贤査宏贤许雅香
- 关键词：家蚕基因克隆半定量RT-PCR免疫反应
- 棉铃虫羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及组织表达被引量：8
- 2008年
- 为了从分子水平上研究棉铃虫Helicoverpa armigera(Hbner)对杀虫剂抗性的产生机理,本文通过RT-PCR和 RACE方法首次从棉铃虫中肠中克隆了一个羧酸酯酶全长cDNA序列。序列分析表明,该基因包含一个1 794 bp的开放读码框,129 bp的5'UTR和139 bp的3'UTR区域。该基因编码597个氨基酸,推测编码蛋白质的等电点pI为 4.92,分子量为67.1 kD,GenBank登录号为EF547544。通过对氨基酸的同源性分析表明,该羧酸酯酶与斜纹夜蛾 Spodopteralitura羧酸酯酶的同源性最高,达60 %。半定量RT-PCR分析表明,该基因在中肠组织中表达量最高,在脂肪体和生殖腺中表达量较低,在头部则不表达。推测该羧酸酯酶基因可能主要参与棉铃虫对外源物质的解毒代谢。
- 王东李兵管京敏赵华强陈玉华沈卫德
- 关键词：棉铃虫羧酸酯酶RACE
- 家蚕基质金属蛋白酶基因Bm-MMP的克隆、序列分析及表达研究被引量：1
- 2009年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)家族是一类蛋白水解酶,能够降解基底膜和细胞外基质中大部分蛋白质。为了研究MMPs对家蚕Bombyxmori基本生理功能的影响,本文利用RACE和RT-PCR方法,首次从家蚕蛹中克隆了一个MMP基因的全长cDNA,命名为Bm-MMP。序列分析表明,Bm-MMP的mRNA存在两个选择性剪切变体,分别命名为Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2。其中Bm-MMP-V1cDNA全长为2257bp,包含一个1686bp的开放阅读框,编码561个氨基酸,预测蛋白质分子量约为62.3kD;Bm-MMP-V2cDNA全长为2188bp。同源性分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2的氨基酸序列与蜡螟Galleria mellonella的Gm1-MMP的氨基酸序列同源性最高,均为88.8%;与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm1-MMP的氨基酸序列同源性,分别为61.2%和64.3%。将Bm-MMP-V1的编码区连接到表达载体pET28a(+)上,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,带有6×His标签的融合蛋白被成功表达。半定量RT-PCR分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在4龄眠蚕、熟蚕、吐丝后36及48h、预蛹中的表达量比5龄中食期与化蛹后的表达量高,推测该基因与家蚕幼虫蜕皮变态有关;LPS诱导5龄3d的幼虫,其Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在血液中的表达量升高,推测Bm-MMP可能与免疫相关。本研究为进一步研究Bm-MMP在家蚕体内的作用机制奠定了基础。
- 管京敏李兵王东刘衬丽沈卫德
- 关键词：家蚕RACE半定量RT-PCR
- 家蚕基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析
- 基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)家族是一类蛋白水解酶，能够降解基底膜和细胞外基质中大部分蛋白质。研究家蚕Bombyxmori基质金属蛋白酶基因，不仅对研究家蚕变态发育的生理调节...
- 管京敏
- 关键词：家蚕基质金属蛋白酶基因克隆基因表达生理代谢变态发育
- 文献传递
