白兴华
- 作品数：7 被引量：60H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- A群猪轮状病毒JS株vp7基因序列分析被引量：4
- 2007年
- 根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与已知的15个毒株vp7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为74.5%～78.5%和75.2%～83.1%,核苷酸系统发育进化树结果表明,JS毒株与轮状病毒G9型参考毒株ICB2185、O-1亲缘关系较近,分为一个群,表明JS毒株血清型为G9型。目前,我国尚未见猪及其它动物轮状病毒G9型流行株的报道。
- 高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力
- 关键词：猪轮状病毒VP7基因
- 猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建被引量：2
- 2007年
- 为构建猪捷申病毒(Porcine testhovirus,PTV)感染性克隆,进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究,根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列,设计并合成了4对特异性引物,PCR扩增并克隆覆盖PTV Swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反复拼接和测序,最终将PTV全长cDNA定向克隆到pBluescript SK(+)中。PCR、双酶切及测序鉴定证明PTV全长cDNA克隆构建成功。与Swine/CH/IMH/03亲本株及NCBI登录的其他PTV毒株序列比对发现,该克隆只有3个位点存在核苷酸及氨基酸突变,分别位于2A、2C及3D中。
- 吴波平冯力时洪艳陈建飞孙东波高秀春白兴华
- 关键词：PTV全长CDNA克隆感染性克隆
- 猪捷申病毒3D蛋白的原核高效表达及其反应活性被引量：8
- 2007年
- 根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以全长基因组重组质粒pSK-PTVFL为模板扩增了3D基因,并将扩增产物定向克隆到原核表达载体pET30a(+)中,阳性质粒转化BL21(DE3),阳性菌经0.3 mmol/L IPTG诱导后,进行Western-blotting检测。结果显示,3D蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的66.1%,且重组蛋白能与PTV Swine/CH/IMH/03株阳性血清发生特异性反应。表明,3D蛋白能在大肠杆菌中高效表达,并具有良好的免疫原性,这为开发相应的鉴别诊断技术奠定了基础。
- 吴波平冯力时洪艳陈建飞孙东波高秀春白兴华
- 关键词：猪捷申病毒3D基因原核表达
- 猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立
- 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、...
- 白兴华冯力陈建飞时洪艳孙东波吴波平高秀春
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒TAQMAN探针
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：11
- 2007年
- 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT-PCR方法只能检测到1.53×103拷贝/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT-PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。
- 白兴华冯力陈建飞时洪艳孙东波吴波平高秀春
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒TAQMAN探针荧光定量RT-PCR
- A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析被引量：1
- 2007年
- 参考GenBank中发表PRVOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与国内外9株PRVVP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较，核苷酸同源性在77．1％～91．1％之间，氨基酸的同源性在89．7％～99．5％之间；在氨基酸系统发育进化树中，JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近．为一个进化群。
- 高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力
- 关键词：PRVVP6基因
- 猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达被引量：35
- 2007年
- 应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。
- 陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性
