刘志华
- 作品数：55 被引量：152H指数：8
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一株绿色木霉及其应用
- 一株绿色木霉及其应用，本发明涉及一株绿色木霉及其应用。本发明的一株绿色木霉为绿色木霉(Trichoderma viride)NECC30006，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰...
- 刘志华于泽洋范海娟王玉成
- 文献传递
- 白桦BplMYB46转录因子的原核表达和重组蛋白的纯化
- 2015年
- 从白桦的转录组中发现一个MYB类转录因子Bpl MYB46,将其与拟南芥的MYB类转录因子进行氨基酸序列比对分析,并将其构建到原核表达载体p GEX-4T-2上,获得重组表达载体p GEX-4T-2-Bpl MYB46,然后导入原核表达菌株BL21中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白的表达。结果显示:Bpl MYB46属于R2R3-MYB类转录因子;在IPTG终浓度为0.4 mmol/L,30℃条件下诱导4 h后p GEX-4T-2-Bpl MYB46原核蛋白表达量最高,主要为包涵体形式;利用尿素梯度透析法和电洗脱法纯化蛋白,发现电洗脱法成功获得浓度和纯度较高的重组蛋白。
- 国会艳刘志华胡萍贾园园张春蕊杨传平王玉成
- 关键词：白桦蛋白纯化
- 白桦的遗传转化及转基因植株的抗虫性被引量：36
- 2003年
- 应用农杆菌介导法首次向白桦 (Betula platy phyllaSuk .)基因组中导入抗虫基因 [蜘蛛杀虫肽与苏云金杆菌杀虫毒蛋白基因 (Bt基因 )C肽序列的嵌合基因 ]。转化结果表明 :共培养 2d的脱菌及防止腐烂的效果和转化率均高 ,液体共培养及液体除菌优于固体共培养及固体除菌 ;最佳外植体为大叶片 ;侵染 2个月之后产生抗性愈伤组织 ,转化率达到 2 2 %。卡那霉素抗性植株中 ,GUS阳性率为 4 3%。进行杀虫肽和nptⅡ基因的PCR(聚合酶链式反应 )均检测出目的带。转化植株目的基因的PCRSouthern(DNA印记杂交 )杂交呈阳性 ,证明获得了转基因植株。
- 詹亚光王玉成王志英杨传平刘志华李彩华
- 关键词：白桦分子生物学检测抗虫性
- 棘孢木霉ACCC30536葡聚糖酶Glu41基因克隆及分析
- 2014年
- 克隆获得生物防治菌棘孢木霉(T.asperellum)ACCC30536菌株葡聚糖酶基因Glu41的c DNA序列和DNA序列,cDNA和DNA的Gen Bank接受号分别为KJ541741和KJ541742,编码区长度为1134bp,编码378个氨基酸。克隆获得的启动子序列长度1500bp,含有6个逆境响应元件。Blast P相似性分析表明该基因与Glyco-hydrolase-16家族中棘孢木霉CBS433.97基因同源性最高相似度是60%,Signal P信号肽分析显示N端第25个和第26个氨基酸中间存在一个信号肽剪切位点(AFA||AP)。Pfam蛋白家族分析显示它属于Glyco-hydrolase-16家族的葡聚糖酶基因。将棘孢木霉ACCC30536菌株葡聚糖酶基因Glu41基因对Glyco-hydrolase-16家族中木霉属的CBS433.97基因组进行同源性搜索,在基因组上获得4个同源序列。4个同源基因表达中仅有Glu41在杨树根茎叶粉的诱导条件下表达。表明棘孢木霉葡聚糖酶基因Glu41与生物防治相关。
- 郭瑞婷王志英于泽洋孔伟浩姚翰文张贺刘志华
- 关键词：葡聚糖酶基因克隆生物信息学
- 一种小规模木霉菌固态发酵方法
- 一种小规模木霉菌固态发酵方法，它涉及一种固态发酵方法。它要解决现有小规模发酵木霉菌存在产孢量少，发酵后期出现自溶现象的问题。方法：一、制备PDA斜面培养基并接种木霉菌，培养后制备菌液；二、制备发酵料并灭菌；三、发酵料接菌...
- 刘志华张荣沭王金杰周畅王玉成
- 文献传递
- 向日葵谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆及抗病功能研究被引量：11
- 2015年
- 为探讨谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因在向日葵抗病机制中的作用,在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上从向日葵耐病品种龙食葵2号中克隆了1个GST的c DNA序列,并进行了表达和功能分析。结果表明:该基因开放阅读框为675bp,编码224个氨基酸残基,分子量为55.45k D,等电点为5.16,命名为Ha GSTU1(Gen Bank登录号为KR071872);Ha GSTU1蛋白属于GST的Tau家族,推测是一种无信号肽的细胞质蛋白,其N端结构域包含结合GSH的G位点,C端结构域包含特异结合底物的H位点;Ha GSTU1与一个橡胶树GST蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为72%。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在叶中表达量最高,其次是花、根、种子和茎,在盘中的表达量最低;干旱、盐、草酸、核盘菌及其代谢物均能诱导向日葵Ha GSTU1基因的表达量出现显著变化。利用农杆菌介导法将该基因导入烟草,提高了转基因烟草叶片对核盘菌的抗性。对抗性株系烟草GST和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性测定发现,转基因烟草叶片中GST和GPX酶活性较野生型提高约2倍,并随着接菌时间的延长,两种酶活性显著升高。初步推断Ha GSTU1具有抗核盘菌的功能。
- 马立功孟庆林张匀华刘志华王志英
- 关键词：向日葵基因克隆功能分析
- 一株棘孢木霉及其应用
- 一株棘孢木霉及其应用，本发明涉及一株棘孢木霉及其应用。本发明的一株棘孢木霉为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)NECC20035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝...
- 刘志华张荣沭王金杰张慧芳季世达王玉成范海娟
- 文献传递
- 刺激植物响应蛋白基因Epl1克隆、原核表达及功能初探
- 2018年
- 【目的】研究刺激植物响应蛋白Epl1对木本植物山新杨的刺激响应功能,为开发新一代提高植物免疫的新型诱导剂奠定基础。【方法】从棘孢木霉ACCC30153菌株中克隆获得一个刺激植物响应蛋白基因Epl1,并进行序列分析和原核表达,将获得的原核重组蛋白rEpl1与山新杨组培苗进行互作,初步探讨rEpl1蛋白对山新杨生长、生理指标、以及生长和防御相关基因转录水平的影响。【结果】刺激植物响应蛋白基因Epl1的cDNA序列全长为417bp,预测蛋白分子量12.6 kDa,属于Cerato-platanin家族;通过构建原核表达载体,成功获得重组蛋白rEpl1;在1μg/mL rEpl1诱导下,山新杨组培苗生长较快、根系旺盛,生物量明显增加,CAT活性在诱导第1 d时为对照的3.51倍,可溶性糖含量和脯氨酸含量在诱导初期急剧积累;山新杨生长素基因LAX2/AUX和水杨酸防御基因JAR2的转录水平分别在蛋白诱导2 d和12 h时达到峰值,分别为对照的873.10和388.02倍。【结论】Epl1基因的克隆、序列分析和原核表达为进一步研究Epl1蛋白诱导植物系统抗病性提供了理论基础;重组蛋白rEpl1与山新杨组培苗互作实验,初步Epl1蛋白能够刺激木本植物在生理及分子水平上的响应,从而促进生长,提高抗性。
- 遇文婧宋小双邓勋平晓帆周琦刘志华
- 关键词：原核表达山新杨
- 木霉菌基因组热激转录因子家族基因特性被引量：2
- 2020年
- 木霉(Trichoderma)是一种良好的生防因子,为揭示木霉热激转录因子(Heat shock transcription factor)基因的功能并为木霉菌种的改良提供基础数据,通过生物信息学分析方法,在7种9株木霉全基因组水平上鉴定出27个HSTF基因,并选取酿酒酵母中的5个HSTF基因作为对照,对它们的系统发育关系、序列特征、表达情况以及蛋白结构进行详细分析;通过克隆链格孢属(Alternaria alternata)真菌胁迫下HSTFTas基因并分析其表达量。研究结果表明:每株木霉含有3个HSTF基因家族成员,分子质量56.1~81.1 kD,等电点(PI)5.50~8.98。HSTF基因序列特征和系统进化分析将木霉的热激转录因子分为3个分支(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)。3类热激转录因子的蛋白质三级结构差异较大,总共含有7~8种保守基序。棘孢木霉(T.asperellum)CBS 433.97的3类HSTF基因在链格孢致病毒素胁迫下均有响应,其表达量分别在诱导24 h、24 h和2 h时提高了1.5、2.6和1.7倍。木霉热激转录因子基因家族有较高保守性,木霉与病原菌互作过程中,木霉的HSTF基因在木霉的响应病原菌胁迫中起了重要作用。
- 赵诣田桢康福思王爱晶安一博郭瑞婷刘志华
- 关键词：木霉热激转录因子基因特性
- 二色补血草LbARP基因的克隆及其表达分析被引量：2
- 2014年
- 从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个生长素抑制蛋白基因LbARP(GenBank登录号为KF886022)。该基因全长698 bp,含有3个外显子和2个内含子,开放读码框(ORF)387 bp,共编码128个氨基酸,推测蛋白质分子量为13.84 kDa,理论等电点为9.69。多序列比对结果显示,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的ARP蛋白序列相似性达到50%以上,具有生长素抑制基因家族的保守结构域。荧光定量PCR结果表明,LbARP基因能够对NaCl、ABA、CuSO4、CdCl2及ZnCl2等非生物胁迫作出应答。
- 刁桂萍柳燕宋佳林佳忱刘志华
- 关键词：二色补血草实时定量PCR
