原冬伟
- 作品数：49 被引量：95H指数：5
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省自然科学基金黑龙江省高等教育教学改革工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 牛化脓隐秘杆菌病肾脏Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达被引量：8
- 2017年
- 通过研究牛化脓隐秘杆菌感染牛肾脏组织的病理学变化及检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达,来确定牛肾脏组织的坏死和细胞凋亡情况。本研究首先筛检5头自然感染化脓隐秘杆菌病牛和2头阴性健康对照牛,采集其肾脏组织样本。采用H.E.染色法观察病理组织学变化;采用免疫组织化学方法来检测肾脏组织中与细胞正负凋亡有关的调节基因Bax和Bcl-2的表达情况以及凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况。结果显示,感染牛肾脏组织有坏死,间质有中性粒细胞浸润;感染组牛肾脏肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9表达呈阳性,与对照组相比,差异显著;有少量肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞Caspase-8和Bcl-2表达呈阳性,但与对照组相比差异不显著。结果表明,化脓隐秘杆菌能够引起牛肾脏组织实质细胞发生坏死和凋亡,且以线粒体凋亡途径为主。
- 范春玲胡丹兰明慧郭东华原冬伟刘琳珊张国华朱战波周玉龙
- 关键词：化脓隐秘杆菌肾脏
- 猪整合素β1蛋白的表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2021年
- 为了制备出猪整合素β1多克隆抗体,根据其氨基酸序列进行生物信息学分析,选取猪整合素β1胞外域具有良好抗原性的位置,根据大肠杆菌偏嗜密码子优化并合成猪整合素β1的重组质粒。接着,使用大肠杆菌原核表达系统进行表达,将纯化的重组蛋白免疫实验兔。通过间接ELISA法检测制备多克隆抗体效价,蛋白免疫印迹的方法对抗体的反应性进行鉴定。实验结果显示,成功表达猪整合素β1蛋白,其蛋白分子质量为102 ku。以纯化后浓度为1 mg·mL^(-1)的重组蛋白免疫,猪整合素β1多克隆抗体效价为1∶12800,能够识别天然整合素β1。研究制备了具有良好免疫原性的猪整合素β1多克隆抗体,为后续猪整合素β1作为猪病病毒感染相关蛋白的研究奠定了基础。
- 王一李春秋栾广宇郭东华张旭原冬伟孙东波
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 一种琼脂凝胶制孔器
- 本实用新型提供一种制孔数量多、速度快的琼脂凝胶制孔器。它是由基盘和圆柱棒组成的，圆柱棒固定在基盘上。所述的圆柱棒的直径为直径5mm、高度为20mm，每7根圆柱棒形成一组，成六边形分布，间距5mm，共42根。所述的基盘为圆...
- 刘家森曲连东郭东春姜骞原冬伟林欢司昌德
- 文献传递
- 多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2013年
- 为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5ku,主要以包涵体形式存在;Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应。将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应。本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础。
- 张爱芹郭东春刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌原核表达多克隆抗体
- 多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株的构建及鉴定被引量：10
- 2012年
- 【目的】构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,并验证其致病性。【方法】采用正向筛选同源重组技术构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,利用PCR对突变株进行鉴定,分析其遗传稳定性、生长特性和致病性。【结果】成功构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,连续传代20代,遗传稳定;突变株体外生长曲线表明,在前6h生长速度稍慢于亲本菌,随后两者生长速度一致。对小鼠的致病性试验表明:经腹腔注射aroA基因缺失突变株在1.0×106 CFU对小鼠无致死性,而亲本菌株在1.0×102 CFU对小鼠是致死性的。【结论】本研究获得多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,对小鼠的致病性是减弱的。多杀性巴氏杆菌突变株的构建有助于研究其致病机理。
- 郭东春卢艳刘家森原冬伟张爱芹姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌基因缺失株毒力
- 鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达被引量：1
- 2013年
- 为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb-gB-gD转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE表明:获得串联表达的gB和gD重组蛋白约60.5 Ku,与预期蛋白的分子质量一致,主要以包涵体的形式存在。Western-blot表明:串联表达的gB和gD重组蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联表达的gB和gD重组蛋白为下一步建立针对鸭肠炎病毒的诊断方法奠定基础。
- 王雅静郭东春刘家森王淑亚原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭肠炎病毒糖蛋白D
- 鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究被引量：2
- 2013年
- 为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌
- 鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭疫里氏杆菌原核表达免疫原性
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选被引量：2
- 2011年
- 为鉴定兔出血症病毒(RHDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达cDNA重组质粒文库,将其转染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选表达兔肝细胞蛋白的阳性SP2/0细胞。以RHDV-VP60蛋白作为固相包被抗原,经筛选,获得能够与VP60蛋白相互结合的表达性阳性SP2/0细胞克隆。测序表明26个克隆与兔的一些功能性蛋白有较高的同源性,其中包括代谢酶类13个、免疫信号通路受体蛋白5个以及其他细胞膜蛋白等。本研究鉴定的与RHDVVP60具有结合性的细胞蛋白为RHDV感染机制的研究奠定了基础。
- 穆亚芳刘家森郭东春李茂中原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒文库构建
- 酒炙车前子提取物对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的影响
- 2021年
- 本试验旨在探讨酒炙车前子提取物对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响。本研究通过在LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症模型中添加不同浓度的酒炙车前子提取物,利用MTT法和荧光定量PCR检测其细胞毒性作用和炎性因子的表达水平。结果显示酒炙车前子提取物对奶牛子宫内膜上皮细胞无毒性作用,在酒炙车前子提取物浓度为150μg/ml时,炎症模型中的炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平显著降低。试验表明酒炙车前子提取物可以显著抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应。
- 赵福江司琳清王玥杜洪峰杜珍珍袁思琦原冬伟鲁文赓
- 关键词：LPS炎症
