吴时友
- 作品数：36 被引量：158H指数：8
- 供职机构：农业部动物检疫所更多>>
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- 用PCR技术快速检测非洲猪瘟病毒被引量：7
- 1996年
- 选择编码非洲猪瘟病毒结构蛋白ＶＰ７３的部分基因片段为模板，用ＰＣＲ技术检测非洲猪瘟病毒ＤＮＡ，电泳分离可见１条长约１ｋｂ的ＤＮＡ扩增带。本方法具有安全、快速。
- 孙书华孙淑芳蒋正军吴时友
- 关键词：非洲猪瘟结构蛋白PCR猪瘟病毒
- 胚胎性别鉴定实用配套技术的初步试验被引量：4
- 1995年
- 胚胎性别鉴定PCR检测试剂盒和经切割取样性别鉴定后的胚胎冷冻保存,是达到胚胎性别鉴定实用化配套技术的主要关键技术。 本试验结果证明:1.在实验室将Y-DNA特异片段引物、dNTP和Tag酶等反应物,按比例配合成试剂盒后,进行冷冻保存的试剂盒,可取得与常规PCR检测操作技术方法的相同效果和准确率;2.采用快速冷冻的方法,冷冻保存切割取样性别鉴定后的胚胎,可取得57.1％(4/7)的移植成功率。
- 刘云海朱化彬罗应荣孙淑芳宫云浩吴时友杨化玉迟吉义
- 关键词：胚胎性别鉴定实用配套技术胚胎冷冻保存胜利油田试验结果PCR技术
- 用PCR鉴定性别的绵羊胚胎移植试验
- 1992年
- 采用deletion-enrichment的方法建立富含绵羊Y染色体DNA文库,筛选出特异克隆,经序列分析,合成一对引物,用PCR扩增Y染色体上特异片段约130bp。在实验室,用初步建立的PCR鉴定胚胎性别技术,对已知性别的6只公绵羊和5只母绵羊的血液样品进行性别鉴定,准确率为100％。在内蒙古牧区生产现场,用研究成功的简易胚胎取样技术和胚胎取样过程中的防污染措施,从绵羊胚胎切取一定数量的细胞经PCR性别鉴定后移植于受体母羊,移植成功18只受体母羊,共怀25只羔羊,有20只羔羊的实际性别与胚胎性别鉴定结果一致,准确率为80％(20/25),其中,公羔与鉴定为雄性胚胎的符合率为87.5％(7/8);母羔与鉴定为雌性胚胎的符合率为76.5％(13/17)。
- 宫云浩吴时友蒋正军罗应荣刘云海朱成宽朱志庆朱化彬白俊品赵振海武林源
- 关键词：胚胎性别鉴定PCR胚胎移植
- 用光生物素核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒被引量：3
- 1990年
- 用光生物素标记牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitisvirus,IBRV)9.6kb DNA片段做探针,可检测出10pg的IBRV DNA、1个TCID50的病毒和1～10个TCID50的实验感染牛精液。用核酸探针检测IBRV与分离病毒的符合率为84.4％。若将采集的样品在牛肾细胞上增毒一次,再抽提培养物的核酸,用核酸探针检测,则敏感性和符合率大为提高。
- 吴时友封启民蒋正军孙书华宫云浩李昌琳张瑞珍
- 关键词：鼻气管炎病毒
- 鸵鸟血清主要有机生化指标的测定
- 本研究测定了5月龄鸵鸟(n=13),12月龄鸵鸟(n=18),30月龄鸵鸟(n=33),48月龄鸵鸟(n=42)的19种非离子指标的血清浓度参考值,并且分析了各参考值受性别和月龄影响的程度。结果表明,月龄对各指标的影响较...
- 尹燕博董武子吴时友马永生陆明哲孙淑芳郭福生何斌
- 文献传递
- 用光生物素标记核酸探针的研究被引量：5
- 1989年
- 我们用澳大利亚Bresatic公司生产的光生物素与国内两家(称甲所和乙所)研制的光生物素进行标记核酸探针作了比较试验。 探针标记 在3个硅化玻璃管中,分别加入5μ1λDNA(0.5μg/μl),于暗室中再分别加入5.5μl光生物素(国产与进口的浓度均为1mg/ml),放在冰浴上,200w汞灯照射25分钟。然后加入100μl 0.1mol TE(0.1mol Tris/HCl pH9.0,1mmol EDTA),用仲丁醇抽提两次,下层水相的体积约剩45μl,再加入22.5μl 7.5molNH_4AC,20.1μl冷无水乙醇,-20℃过夜,15000r/min离心,抽干,分别溶于27.5μl TE中。
- 宫云浩孙书华吴时友杨承渝J.Cowley
- 关键词：核酸探针核酸
- 光生物素标记的口蹄疫病毒cDNA探针的制备及其对口蹄疫病毒RNA检测的试验研究被引量：16
- 1991年
- 本文首次报道了利用pF1034质粒制备FMDV O型特异性探针,并通过PCR反应扩增FMDO_1K株病毒基因组的第2962位与3071位之间共110bp序列,制备了能检测O型、A型和亚洲I型FMDV RNA的群(组)特异性探针。用硝酸纤维素膜斑点杂交试验表明,二者均能检测出10pg水平的O_9K毒株的纯RNA;但前者只与O型FMDV RNA杂交,与A型及亚洲I型FMDV RNA无交叉杂交现象;而后者则能与O型、A型和亚洲I型的FMDV RNA发生杂交反应。对照试验显示:此两种探针与SVDV ssRNA、BTV dsRNA、EHDV dsRNA、DHV ssRNA、PRV DNA、乳鼠组织细胞RNA、BHK_(21)克隆13细胞RNA及DNA等均不出现交叉杂交现象,但与IBR DNA有假阳性杂交反应。
- 吴时友杨承谕陈书琨沈正达王锡祯
- 关键词：口蹄疫病毒CDNA探针斑点杂交
- 应用PCR技术检测伪狂犬病病毒被引量：3
- 1992年
- 试验针对伪狂犬病病毒基因的特点,设计一对引物,对伪狂犬病病毒的DNA和细胞毒直接煮沸产物进行PCR扩增,30个循环后,经电泳分离,紫外灯下可见到一条明显的DNA带,其大小为262 bp。
- 杨元杰孟广校战克俭陈忠国宫云浩蒋正军吴时友
- 关键词：PCR伪狂犬病病毒
- 应用RT—PCR检测口蹄疫病毒(FMDV)的研究初报被引量：12
- 1991年
- 前言 口蹄疫(FMD)是由FMDV引起偶蹄兽的一种急性发热性高度接触性传染病。目前,我国对FMD的查毒方法一般为乳鼠接种试验结合反向间接血凝试验以及病毒分离试验。这些查毒方法因屠宰品中病毒含量较少,往往容易造成漏检,并且所需时间又长,由于检测不及时,会造成FMD的蔓延。近几年来。
- 吴时友蒋正军宫云浩
- 关键词：口蹄疫RT-PCR病毒
- 核酸探针技术在禽病研究中的应用
- 1991年
- 核酸探针技术是近几年来随着分子生物学技术的迅速发展而建立起的一种新的检测技术,它灵敏度高,特异性强,且快速方便,开辟了临床诊断技术的新领域,广泛应用于疾病的诊断、病原体相关性研究等。在禽病研究中,核酸探针用于诊断疾病、比较毒株和研究病原菌感染机制方而的不少研究。在抗病育种方而,已将其作为导入的目的基因的主要检测手段之一。本文仅就核酸探针技术在禽病研究中的应用做一简述。
- 朱其太吴时友
- 关键词：家禽病害核酸探针
