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纤维素酶研究进展被引量：21: 2007年; 随着石油资源的日益枯竭,寻求廉价的、清洁的可再生能源成为各国能源领域的重要研究任务。纤维素物质的利用与转化对于解决世界环境污染以及能源危机等问题具有十分重要的意义。纤维素酶能有效地将纤维素物质水解成单糖,进而发酵生产乙醇、氢气以及微生物油脂等,因此纤维素酶日益受到人们的关注。文章在了解了纤维素酶的结构以及作用机理的基础上,对纤维素酶的各种来源、制取工艺和应用领域的研究进展作了详细的介绍,并对其今后的研究趋势进行了展望。; 张杰张晓东孟祥梅朱小玲; 关键词：纤维素酶燃料乙醇微生物油脂制取工艺

三种哺乳动物朊蛋白基因的克隆与分析被引量：5: 2006年; 以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G-C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPⅠ锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。; 张杰刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁; 关键词：海绵状脑病朊蛋白基因朊病毒绵羊

牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达被引量：3: 2007年; 利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。; 路伟张鹏张杰刘永生卫广森陈豪泰姜海霞朱小玲; 关键词：克隆

抗秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: [目的]本研究拟采用秦川黄牛重组成熟朊蛋白(PrP)的纯化复性产物作为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出抗牛成熟朊蛋白的单抗(mAb)，为研制疯牛病免疫诊断试剂盒奠定基础。 [方法]将本实验室保存的含有秦川黄牛成熟Pr...; 朱小玲; 关键词：单克隆抗体间接ELISA 疯牛病; 文献传递

秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2006年; 目的制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗。方法用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株。以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。结果获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。结论抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂。; 朱小玲刘永生张杰吴润陈豪泰姜海霞路伟谢庆阁; 关键词：牛海绵样脑病单克隆抗体间接ELISA

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析被引量：3: 2007年; 为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prnd的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prnd编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prnd编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。; 张杰张鹏刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁; 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白朊蛋白基因

人朊蛋白基因的克隆与原核表达被引量：8: 2006年; 以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入E．coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E．coli BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．; 姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁; 关键词：朊蛋白基因克隆原核表达

李氏杆菌溶血素基因的表达及活性分析被引量：4: 2007年; 根据LMO溶血素基因hlyA设计引物,PCR扩增hlyA,将扩增产物与pMD18-T连接,重组质粒经酶切鉴定、PCR分析以及确证性测序。将由重组质粒pMD18-hlyA上扩增的缺失信号肽序列的目的片段与表达载体DGEX-4T-1分别酶切连接后,转化BL21细胞。筛选阳性克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析,纯化重组融合蛋白进行溶血试验、小鼠致病力试验和间接ELISA分析。结果表明hlyA基因在大肠杆菌中成功表达分子量82Ku的融合蛋白,能裂解红细胞,且能被LMO阳性血清所识别。一定剂量腹腔注射能将小鼠致死。以此为包被抗原的间接ELISA可以将LMO阴、阳性血清分开。这表明GST-LLO融合蛋白具有良好的生物活性,可用于李氏杆菌病的间接ELISA诊断。; 张杰骆学农郑亚东李辉伏小平朱小玲; 关键词：活性分析

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朱小玲