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定点整合人Bcl-2基因的CHO/dhfr-细胞株的建立被引量：1: 2005年; 构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达。通过流式细胞仪和DNALadder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血清IMDM培养基中细胞的活细胞数目和活细胞比例。结果获得了稳定表达Bcl-2基因的细胞株CHO-Bcl-2,该细胞株能高水平表达Bcl-2蛋白。在无血清培养过程中,CHO-Bcl-2细胞比对照细胞保持高约15%的活细胞比例,细胞总数高25%。CHO-Bcl-2在高NH4+(50mmol/L)培养条件下具有较低的凋亡水平。建立了能够高表达Bcl-2基因并具有一定的抗凋亡能力的重组CHO/dhfr-细胞株。; 许凌峰刘志刚孙志伟林建波杜韫刘姗俞炜源; 关键词：BCL-2基因细胞培养凋亡

制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法: 本发明公开了一种制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法。该方法包括如下步骤：以A型肉毒毒素重组蛋白rAHc为免疫原，免疫动物，制备得到抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体。本发明的制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法，去除了抗...; 孙志伟余云舟俞炜源杜韫林建波; 文献传递

日本脑炎病毒C蛋白对其复制子载体自主复制活性的影响: 2010年; 为了研制具有高效自主复制能力的日本脑炎病毒(JEV)复制子载体,验证其作为新型复制子疫苗载体的可能性。以保留全长核心蛋白C基因的JEV复制子载体pCTCJEV为基础,通过PCR的方法减短C蛋白的部分基因序列,分别保留C23和C68位氨基酸,以LacZ基因作为报告基因,构建了C基因长短不同的JEV复制子载体pCMW-2M-1LACZ、pCMW-2M-3LACZ。将复制子载体转染表达JEV结构蛋白的细胞系CME-4,通过LacZ的表达检测JEV复制子载体表达外源蛋白的能力,反映了JEV的系列复制子载体的自主复制能力。结果保留C基因全长,C68、C23的复制子载体表达外源蛋白的能力相当,以上结果说明仅仅保留C蛋白的69个核苷酸即可保留JEV复制子载体的自主复制能力,为进一步优化JEV复制子载体,将该载体开发研制成为高效表达外源蛋白的疫苗载体提供了依据。; 黄莺刘珊杨鹏王超杜韫孙志伟俞炜源; 关键词：JEV C蛋白

proUK-KGDW融合基因在CHO细胞中的高表达被引量：2: 2005年; 利用常规分子生物学技术,构建了新型高效的proUK-KGDW融合基因的分泌型哺乳动物细胞表达载体。将该载体线性化后转染CHO/dhfr-细胞,经G418筛选获得阳性克隆,然后挑取表达水平较高的克隆进行MTX加压扩增,以提高proUK-KGDW杂合体的表达水平,经2～3轮MTX加压扩增,获得多株表达水平超过10μg/(106细胞·24h)的稳定的高表达细胞株,为proUK-KGDW杂合体的制备及功能研究奠定了基础。; 杜韫刘志刚林建波徐桂清俞炜源; 关键词：重组蛋白

日本脑炎病毒SA14-14-2E蛋白结构域Ⅲ的抗原性和免疫原性分析被引量：3: 2009年; 为了表达日本脑炎病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域DⅢ区,了解其作为亚单位疫苗的可能性,本研究根据SA14-14-2病毒株序列(GenBank Accession No.D90195)设计两条引物,以全长JEV感染性克隆pBR-JTF为模板,通过PCR扩增出JEVE蛋白DⅢ的cDNA片段,构建了原核表达载体pET-JEDⅢ,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行融合表达。融合蛋白为可溶性表达,表达量约占菌体蛋白的75%。用纯化后蛋白免疫新西兰兔和BALB/C鼠,通过ELISA,Western blotting,噬斑减少实验,及乳鼠攻毒实验验证JEDⅢ的抗原性和免疫原性。Western blotting及ELISA结果表明纯化后的表达产物具有良好的抗原性,纯化的JEDⅢ蛋白免疫新西兰兔,可以获得高达1:7×105滴度的抗JEV特异性抗体;JEDⅢ蛋白免疫BALB/C鼠,可以获得1:8.2×104滴度的抗JEV特异性抗体。并且获得1:256滴度的中和抗体,乳鼠攻毒实验能达到75%的保护效果。以上结果说明本研究表达、纯化的重组JEDⅢ蛋白,免疫小鼠以及兔后,能产生抗JEV的特异性抗体,中和性抗体,能够保护部分乳鼠接受毒种的攻击,抗原性及免疫原性较好,有进一步开发研制成亚单位疫苗的潜能。; 黄莺刘珊杨鹏杜韫孙志伟俞炜源; 关键词：日本脑炎病毒 E蛋白亚单位疫苗

抗降解的IIn-UK融合蛋白在CHO细胞中的高表达研究: 为了研制对血栓特异的新型导向溶栓制剂,本实验室在以前的工作中,利用噬菌体表面呈现技术,筛选到一株对人纤维蛋白特异的鼠单链抗体,在对该鼠抗体可变区进行结构模建的基础上,对其进行了人源化改造和体外亲和力成熟, 得到亲和力和特...; 林建波刘志刚杜韫王双俞炜源; 文献传递

B型肉毒毒素受体结合区C片段在大肠杆菌中的表达及免疫原性研究被引量：3: 2010年; 目的:在大肠杆菌中表达、纯化B型肉毒毒素受体结合区C片段(BHc-C),研究其免疫原性。方法:将BHc-C基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达GST-BHc-C融合蛋白并通过亲和纯化;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备免疫血清,采用ELISA检测免疫血清的效价并测定其抗B型肉毒毒素中和活性。结果:在大肠杆菌中表达了GST-BHc-C融合蛋白;以该融合蛋白免疫小鼠获得高效价免疫血清,且该免疫血清具有中和活性。结论:获得了GST-BHc-C融合蛋白,并证实其具有免疫原性。; 杜韫王文斌余云舟王瑞琳俞炜源孙志伟; 关键词：B型肉毒毒素原核表达免疫原性

抗人肿瘤坏死因子α人源性中和抗体的研制: 人肿瘤坏死因子α(hTNF-α)是类风湿性关节炎(RA)、炎症性肠病(Crohn’s)、银屑病及强直性脊髓炎等多种自身免疫病密切相关的重要炎症因子,hTNF-α中和抗体被认为是目前治疗这些疾病最有效的药物之一。目前已有2...; 王双杜韫孙志伟; 文献传递

重组单链抗体-低分子质量尿激酶融合蛋白在CHO细胞中的抗降解研究被引量：5: 2005年; 抗人纤维蛋白单链抗体-低分子质量尿激酶(IIn-UK)融合蛋白,兼有单链抗体对纤维蛋白的亲和性和尿激酶的溶栓活性,有望开发成为新型导向溶栓药物.但基于通用连接肽(G4S)3的IIn-linker-UK融合蛋白在CHO细胞中表达时出现明显的降解.为了解决此问题,利用分子生物学方法,对IIn-UK融合蛋白进行了分子改造,包括置换连接肽,改变两个半分子(moiety)的相对位置,以及对连接肽附近明确的蛋白酶位点进行突变等方法,并分别研究了改造后的11种IIn-linker-UK或UK-linker-IIn突变体在CHO细胞中分泌性表达时的稳定性,最终筛选到一种抗降解的突变体.; 刘志刚林建波杜韫俞炜源; 关键词：融合蛋白连接肽降解 CHO细胞

制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法: 本发明公开了一种制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法。该方法包括如下步骤：以A型肉毒毒素重组蛋白rAHc为免疫原，免疫动物，制备得到抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体。本发明的制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法，去除了抗...; 孙志伟余云舟俞炜源杜韫林建波; 文献传递

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杜韫