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Klenow大片段聚合酶及T_4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用被引量：3: 2006年; 利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5′→3′聚合酶活性和T4DNA聚合酶3′→5′外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST。用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3′凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3′凸端削平。在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆。结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中。; 董玲陈创夫韩亚杰张金波祝建波

磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达载体的构建: 2006年; 根据genebank中公布的pmi基因序列通过PCR的方法从大肠杆菌中得到目的片断,并与pGM-T easy载体连接。将鉴定为阳性重组子中的目的基因进一步与植物表达载体pBI121的不同区域连接,成功构建了载体NPTII-pmi-121和pmi-121△NPTII。; 王延蛟陈创夫张金波武冬梅董玲祝建波; 关键词：甘露糖

烟草坏死病毒植物病毒载体的构建: 2006年; 烟草坏死病毒A是单链RNA病毒,它的全基因组序列已被测出,含有6个开放表达阅读框。利用套叠PCR的方法将克隆于pMD18-T载体上烟草坏死病毒A基因的ORFⅣ与ORFⅤ(外壳蛋白)之间的非编码区形成突变SphI位点,最后将突变后的TNV-A全基因插入植物表达载体pE1802的SalI/SmaI之间,构建成植物病毒载体pE1802-TNV。; 韩亚杰祝建波王远志董玲任雪艳陈创夫; 关键词：套叠PCR

病毒介导的外源蛋白在植物中的表达被引量：5: 2006年; 植物病毒载体是一类新型的外源基因表达载体,与利用转基因植物表达外源基因相比,植物病毒载体具有表达水平高、速度快、宿主广等优点。文章主要介绍了病毒载体的发展过程,以及病毒载体的构建策略,如“全病毒”和“重组病毒”载体策略。; 韩亚杰祝建波董玲刘辉陈创夫; 关键词：植物病毒转基因

提高植物疫苗外源蛋白表达量的研究进展被引量：6: 2006年; 综述了在转基因植物中实现外源基因高效表达的多种途径,其中包括启动子优化,添加5-′3-′非翻译序列,使用增强子,对目的基因进行改造与优化,消除位置效应,内含子在增强基因表达方面的应用,重组蛋白的细胞定位。; 董玲李海龙刘辉韩亚杰陈创夫; 关键词：转基因植物

雏鸡感染堆型艾美耳球虫早熟株外周血T淋巴细胞的动态变化: 2004年; 8日龄雏鸡(免疫组)每只接种3×103个堆型艾美尔球虫(Eimeria.acervulina)早熟株孢子化卵囊,在第16日龄免疫组和不免疫攻毒组每只攻毒堆型艾美尔球虫强毒株孢子代卵囊5×104个,用а 醋酸萘酯染色法计数T淋巴细胞数量,得T淋巴细胞所占淋巴细胞的百分率。t检验结果表明,免疫攻毒组T淋巴细胞的百分率与不免疫攻毒组和空白对照组的T淋巴细胞的百分率差异极显著,显示该早熟株具有较好的免疫保护效果。; 李海龙董玲苟谦王开胜; 关键词：早熟株雏鸡堆型艾美耳球虫卵囊强毒株

新疆绵羊种布鲁氏菌HtrA基因与GroEL基因的克隆及其原核表达: 2007年; 根据已发表的牛流产型布鲁氏菌HtrA(High temperature requirment A)基因、GroEL(热休克蛋白)基因设计特异性引物,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组中扩增出HtrA、GroEL基因片段,将HtrA、GroEL基因片段纯化后分别克隆到T载体上测序,结果表明新疆绵羊种布鲁氏菌HtrA基因片段长1542 bp,编码513个氨基酸,与发表的牛种(B.abortus)、羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)的HtrA基因序列的同源性分别为99.68%、99.81%、99.55%。GroEL基因片段长1641 bp,编码546个氨基酸,与B.melitensis、B.suis以及B.abortus GroEL基因的核苷酸序列同源性分别为99.88%、99.82%、99.88%。HtrA基因和GroEL基因与发表的B.abortus、B.melitensis、B.suis的HtrA基因和GroEL基因序列的具有很高的同源性。按正确的阅读框架分别将两基因片段定向克隆到表达载体pET-28a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,HtrA、GroEL基因能在大肠杆菌中成功表达,表达的蛋白分子量都约为60 Ku,并能和布鲁氏菌免疫兔子产生的抗体发生特异性的结合。; 刘辉陈创夫韩亚杰董玲许程剑; 关键词：布鲁氏菌 GROEL 克隆

新疆绵羊种布鲁氏菌HtrA基因的克隆与序列分析被引量：2: 2006年; 根据已发表的牛流产型布鲁氏菌(B.abrotus)HtrA(High temperature requirment A)基因的核酸序列设计引物,从新疆绵羊种布鲁氏菌(B.ovis)基因组中扩增到了大约1600bp的片段。将该片段纯化后克隆到PBS-T载体上,对所得到的重组质粒进行PCR鉴定、酶切分析后,对克隆的片段进行测序表明,新疆绵羊种布鲁氏菌HtrA基因与发表的牛流产型布鲁氏菌、马耳他布鲁氏菌(B.melitensis)、猪种布鲁氏菌(B.suis)的HtrA基因核苷酸序列的同源性分别为99.68%、99.81%、99.55%,推导的氨基酸序列也存在很高的同源性。; 刘辉陈创夫韩亚杰董玲; 关键词：布鲁氏菌克隆

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董玲